人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜新生血管的实验研究

发布时间：2017-05-17 00:09

  本文关键词：人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜新生血管的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究人羊膜上皮细胞培养液对角膜新生血管的抑制作用及机制。 方法：1、体外培养及鉴定人羊膜上皮细胞(HAECs)并收集培养液，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测色素上皮衍生因子（PEDF）和白介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）的含量。 2、兔角膜上皮细胞分别用无血清DMEM培养基、HAECs培养液、混合培养液（DMEM+HAECs培养液）培养48小时, QRT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及白介素1（IL-1β）的表达。CCK8法检测各组培养液对角膜上皮细胞增殖的影响。 3、划痕法和CCK8法检测以上各组培养液对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）迁移和增殖的影响。原子力显微镜（AFM）观察HAECs培养液对HUVECs超微结构的影响。 结果：1、培养出免疫组化角蛋白阳性的HAECs，ELISA检测HAECs培养液含PEDF(70.41±0.68)μg/L，IL-1Ra (153.56±0.36)ng/L。 2、与无血清DMEM组相比， HAECs培养液组的兔角膜上皮细胞VEGFmRNA(1.00±0.22vs2.98±0.46)、bFGFmRNA(1.00±0.36vs2.55±0.48)、IL-1βmRNA(1.00±0.02vs32.88±0.11)的表达明显受到抑制(P＜0.05)；HAECs培养液组的角膜上皮细胞增殖(2.321±0.034)明显高于无血清DMEM组(1.862±0.039),混合培养液组居中(P＜0.05)。 3、与无血清DMEM组相比，HAECs培养液组HUVECs的增殖(1.941±0.036vs2.144±0.059)明显下降(P＜0.05)，HUVECs的迁移率降低。原子力显微镜观察显示HAECs培养液组的血管内皮细胞膜粗糙度增加、表面颗粒紊乱，细胞间连接及伪足减少。 结论：HAECs培养液可抑制角膜上皮VEGF、bFGF、IL-1β的表达，抑制血管内皮细胞增殖和迁移，改变其超微结构。这可能是其抑制角膜新生血管的机制之一。
【关键词】：羊膜上皮细胞 角膜新生血管 血管内皮生长因子 血管内皮细胞原子力显微镜
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R772.2
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-6
• 目录6-7
• 前言7-14
• 1 羊膜上皮细胞的研究进展8-9
• 2 角膜新生血管形成机制的研究进展9-14
• 实验目的14
• 第一部分 人羊膜上皮细胞的培养、鉴定及培养液的制备14-24
• 1 引言14
• 2 实验材料与方法14-20
• 3 结果20-21
• 4 讨论21-24
• 第二部分 人羊膜上皮细胞培养液作用于兔角膜上皮细胞24-36
• 1 引言24
• 2 实验材料与方法24-29
• 3 结果29-33
• 4 讨论33-36
• 第三部分 人羊膜上皮细胞培养液作用于脐静脉血管内皮细胞36-43
• 1 引言36
• 2 实验材料与方法36-38
• 3 结果38-41
• 4 讨论41-43
• 全文结论43-44
• 问题和展望44-45
• 参考文献45-51
• 英文缩略词表51-52
• 附图52-58
• 在校期间发表的论文58-59
• 致谢59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 刘小勇;陈剑;吴静;周清;王彦平;李红;徐锦堂;赵松滨;;人羊膜上皮细胞的原代及传代培养[J];广东医学;2007年02期

2 金玲;陈剑;吴静;徐锦堂;周清;刘小勇;赵松滨;;人羊膜上皮细胞的分离、纯化及其生物学特性研究[J];广东医学;2010年16期

3 金玲;陈剑;吴静;徐锦堂;周清;刘小勇;;人羊膜上皮细胞的干细胞特性[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年19期

4 杨水平;陈剑;;人羊膜上皮细胞分化为结膜上皮细胞实验研究[J];中国职业医学;2011年01期

5 金玲;陈剑;吴静;徐锦堂;周清;赵松滨;;培养的兔羊膜上皮细胞构建角膜表层移植片的研究[J];眼科研究;2009年04期

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本文编号：372182