白藜芦醇对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖的影响及其机制的研究

发布时间：2017-05-20 20:19

  本文关键词：白藜芦醇对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖的影响及其机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:糖尿病是一种代谢紊乱疾病,可以导致糖尿病特有的微血管并发症(视网膜病变、肾病、神经病变)和大血管并发症(心血管疾病和中风),最终导致寿命缩短。糖尿病视网膜病(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常见和严重的微血管并发症之一,是成人后天性致盲的主要原因,在失明的患者中85%是由DR引起。DR的特点是新生血管形成,发病机制一般认为是由于视网膜微血管系统受损所致,是多种因素相互作用导致,主要包括周细胞丢失、视神经网膜异常和新生血管形成。而视网膜毛细血管内皮细胞增生是新生血管形成的前提。白藜芦醇(Resveratrol,Res)是从红酒内提取的多酚类物质,它对眼部的主要作用包括:抗氧化应激、抗细胞凋亡、抗肿瘤基因、抗炎、抗血管生成以及血管舒张。基于新血管生成是糖尿病眼病发生发展的病理机制之一,本研究观察了Res对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)增殖和细胞周期的干预作用,并对其分子机制进行了探讨,为Res在糖尿病眼病治疗方面提供了新的实验依据。方法:1细胞增殖活性的检测将处于对数生长期的人视网膜血管内皮细胞(HRCECs)接种于96孔板中,分为:高渗组(M)(25 mmol/L甘露醇),正常糖浓度组(N)(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(H)(25 mmol/L葡萄糖),高糖+白藜芦醇组(R)(R1、R2、R3、R4组分别为25mmol/L葡萄糖加入25、50、100、200μmol/L Res),作用24 h后用CCK-8法检测细胞增殖活性。细胞计数检测药物作用24h后的HRCECs细胞增殖活性,处理条件同上。2细胞周期的检测分为高渗组(M)(加入25 mmol/L甘露醇),正常糖浓度组(N)(5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(H)(25 mmol/L葡萄糖),高糖+白藜芦醇组(R)(R2、R3组分别为25mmol/L葡萄糖加如50、100μmol/L Res),培养24h后,用流式细胞仪检测细胞周期分布情况。3分组情况同方法2,Western blot及real-time PCR法检测细胞周期相关蛋白及其上游m RNA的表达情况。结果:1细胞增殖活性的检测:与正常糖浓度组(N)相比,高渗组(M)细胞增殖活性无显著性差异,而高糖组(H)细胞增殖活性则明显增高(P0.05);不同浓度的Res处理24h后,R1、R2、R3、R4组细胞增殖活性较高糖组分别下降了4%、11%、16、47%,其中R2、R3、R4组与高糖组比较有显著性差异(P0.05)(Fig.2A);细胞计数分析结果显示,与正常糖浓度组(N)相比,高渗组(M)无显著性差异,而高糖组(H)细胞计数则明显增高(P0.05);用不同浓度的Res作用HRCECs细胞24 h后,细胞数目明显减少,与H组相比,R1、R2、R3、R4组细胞数量分别减少了17%、41%、58%、75%(P均0.05)(Fig.2B,Fig.3)。2流式细胞学结果:高糖组(H)S期的细胞数目明显减少(P0.05)。高糖环境下不同浓度Res(50、100μmol/L)处理24h后,可使处于S期的细胞数显著增加(P0.05),抑制高糖环境下HRCECs细胞周期进程(Fig.4,Table 1)。3 Western blot及Real-time PCR结果示:与正常糖浓度组(N)比较,高渗组(M)细胞的cyclin A1、CDK2、PCNA m RNA及蛋白的表达无显著性差异,而高糖组(H)cyclin A1、CDK2、PCNA的表达增加,P21CIP1表达下降,P均0.05;Res(50、100μmol/L)处理24h可剂量依赖性地抑制高糖下HRCRCs细胞的cyclin A1、CDK2、PCNA的表达,增加P21CIP1的表达量(P均0.05)(Fig.5-Fig.8,Table 2,Table 3)。结论:1高糖培养可能通过对细胞进程的影响及上调cyclin A1、CDK2、PCNA的表达,抑制P21CIP1表达,从而增加HRCECs细胞的增殖活性;2 Res剂量依赖性地抑制高糖环境下HRCECs细胞的增殖活性与对细胞周期的调控,抑制cyclin A1、CDK2、PCNA表达及上调P21CIP1表达有关。
【关键词】：白藜芦醇 人视网膜血管内皮细胞 HRCECs 周期相关蛋白 细胞周期
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-16
• 结果16-18
• 附图18-28
• 附表28-30
• 讨论30-33
• 结论33
• 参考文献33-35
• 综述 白藜芦醇对眼部的保护机制35-45
• 参考文献40-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘涛;巩增锋;尹浩;景玉宏;;白藜芦醇改善糖尿病血管炎症反应及其与RAGE信号的相关性[J];中国糖尿病杂志;2012年06期

  本文关键词：白藜芦醇对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖的影响及其机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：382729