京尼平交联羊膜的制备、体外性能及治疗角膜碱烧伤的实验研究

发布时间：2017-06-28 12:17

  本文关键词：京尼平交联羊膜的制备、体外性能及治疗角膜碱烧伤的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的: 研制一种新型的脱细胞羊膜制品—京尼平交联羊膜，观察其生物物理性状及在体外的细胞相容性，并且进一步观察其有效性，通过对兔角膜急性碱烧伤治疗效果的观察，探讨其在修复眼表过程中发挥作用的机制，为该新型的生物材料的临床应用提供前期试验依据。 本研究分为三部分： 部分一：京尼平交联羊膜的制备 部分二：京尼平交联羊膜的体外性能研究 部分三：京尼平交联羊膜治疗兔角膜急性碱烧伤的实验研究 方法 部分一:经一定程序将羊膜用0.5%、1%的京尼平溶液进行交联制得京尼平交联羊膜，在肉眼下观察大体外观、检测抗缝线撕裂能力、显微镜下观察细微结构，HE染色，扫描电镜观察。 部分二：按照实验一的方法，分别随机选取制备好的新鲜及交联羊膜，按实验进行分组。每一组分别进行检测： 1、厚度测定：滤纸吸干待检羊膜表面水分，用厚度仪（精度0.01mm）夹住羊膜，适当地加压，读出指针读数 2、力学性能测定：在生物材料拉力测试机上对各组样品羊膜进行单向拉伸，样品断裂时，计算机自动输出抗拉强度（Mpa）、断裂伸长率（%）、弹性模量(Mpa)及应力—应变曲线等。 3、降解率测定：将制备好的两种样品羊膜在室温下自然风干，并剪取同样大小的相等数量的两种羊膜数片，在固定的时间点分别称量其浸入胶原酶溶液前后的质量M0，M1，降解率=(M0-M1/M0)%， 4、体外细胞毒性试验：将京尼平交联羊膜按一定面积容量比（1cm2/1ml）浸入细胞培养液中72h获取京尼平羊膜的浸提液，以该浸提液代替常用细胞培养液，以常用细胞培养液组作为对照，培养相同密度小鼠成纤维细胞，于培养的2、4、7天行MTT，计算RGR 部分三：60只健康新西兰大白兔，均无眼部病变。以右眼造碱烧伤模型（重度）后随机分成3组，每组20只。A组：烧伤后移植G-HAM。B组：烧伤后移植AM。C组：不做任何处理，对照组，仅滴眼药水。术后每天观察眼表大体状况，羊膜脱落时间。从第7天开始，每周观察术眼角膜混浊度和新生血管并对两者评分。同时取角膜HE染色。 结果 部分一：京尼平交联后的羊膜肉眼下见：外观呈淡蓝色半透明膜，镊子提起时较易成型，不易卷曲、撕裂，质地柔韧。电镜下可见交联后的羊膜胶原之间的联系更加致密，结构未改变。 部分二：1、组织厚度测定结果显示，京尼平交联后的羊膜平均厚度(0.040±0.009)mm,新鲜羊膜平均厚度(0.038±0.010)mm，京尼平交联羊膜略有增厚，但差异无统计学意义（p0.05） 2、两组羊膜生物力学性能测定结果：京尼平交联羊膜的最大应力、抗拉强度，断裂伸长率，弹性模量与新鲜脱细胞羊膜的最大应力、抗拉强度，断裂伸长率，弹性模量相比具有增加，且差异有统计学意义（p0.05）。 3、第一天观察结束时，AM已不成膜形，完全溶解，弥散在消化液中。G-HAM仍可见，外观未发生变化，重量基本上没有变化，降解率:Day1（4.48±0.86）%，Day3（4.96±1.39）%,Day5（9.44±2.67）%。Week（115.25±4.08）%，Week（234.93±6.07）%,Week3（50.49±4.77）%，Week4（74.62±3.81）%。 4、京尼平交联羊膜体外细胞毒性：按照国标GB／T16886．5—2003的规定[5]，京尼平交联羊膜体外细胞毒性分级0～1级，无或低细胞毒性,符合生物材料要求。 部分三：每只眼均为重度碱烧伤，总共参与实验兔眼54只，相应观察结果如下： 1、京尼平交联羊膜完全溶解脱落的时间为20.00±10.418d，而普通羊膜为9.20±10.618d，，差异有统计学意义(P0.01)。 2、术后14、28、42天,京尼平交联羊膜组CNV评分与对照组比差异有统计学意义（P0.01），术后14、28、42天,普通羊膜组CNV评分与对照组差异无统计学意义(p0.05)。 3、术后14d，京尼平交联羊膜组与普通羊膜组角膜浑浊度评分与 对照组差异均无统计学意义（p10.05，p20.05）；术后28、42d，京尼平羊膜组与普通羊膜组角膜浑浊度评分与对照组相比差异均有统计学意义（P0.01）；而G-HAM组与AM组角膜浑浊度评分差异无统计学意义(P0.05) 4、在1个半月的观察期，分别有1只眼(AM组)和3只眼(control组) 发生角膜穿孔，排出实验。 结论 1、京尼平交联羊膜具有良好的生物力学特性，其柔韧性和可塑性优于单层羊膜，其在厚度没有增加的情况下，可延长在眼表的停留时间，并且没有细胞毒性。因此，京尼平交联羊膜是一种能克服传统羊膜所存在的缺点的新型生物材料。 2、治疗角膜化学性碱烧伤，京尼平交联羊膜与普通新鲜羊膜相比，它在抑制新生血管以及减轻角膜混浊方面效果更显著。后期新生成的角膜上皮也更稳定，排列更规则。另外它发生溶解的时间明显延长，能在角膜创面覆盖更久，既覆盖了创面又给角膜细胞的再生提供了一个良好的生物支架，从而达到修复眼表的目的。 3、京尼平交联羊膜具有潜在的研发应用价值，其在眼表疾病中的应用价值有待进一步研究。
【关键词】：京尼平 羊膜 交联 羊膜移植 眼表疾病 组织工程
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R779.65
【目录】：

• 符号说明5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-16
• 前言16-18
• 第一部分 京尼平交联羊膜的制备及组织形态学观察18-21
• 材料与方法18-19
• 结果19-20
• 讨论20-21
• 第二部分 京尼平交联羊膜的体外性能研究21-27
• 材料与方法21-22
• 结果22-24
• 讨论24-27
• 第三部分 京尼平交联羊膜治疗兔角膜急性碱烧伤效果的实验研究27-37
• 材料与方法27-29
• 结果29-34
• 讨论34-37
• 全文结论37-38
• 参考文献38-41
• 文献综述 角膜塑形术及研究现状41-50
• 参考文献46-50
• 致谢50-51
• 攻读硕士学位期间发表的文章51-52

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 乐敬宝;李新平;何兰芬;;软性角膜接触镜在角膜病变中的临床应用[J];大理学院学报;2011年02期

2 郑莎,谢汉平,孟晓红,王仕军,刘勇;羊膜移植治疗重度眼烧伤及后遗症的临床观察[J];第三军医大学学报;2004年05期

3 王岚;赵敏;陈卫军;;京尼平交联羊膜的制备及其体外性能研究[J];第三军医大学学报;2012年04期

4 田淑琴;;速凝剂烧伤角结膜的急救与护理[J];护士进修杂志;2008年22期

5 王萍;眼石灰烧伤18例法医学鉴定分析[J];法医学杂志;1996年02期

6 叶健章;尹转通;古乐群;;无缝线新鲜羊膜覆盖术治疗急性期眼表烧伤19例临床观察[J];广东医学院学报;2008年04期

7 李光玲,冯熠;新鲜羊膜移植治疗早期重症眼部烧伤14例[J];美中国际眼科杂志;2002年02期

8 何庆华;王大江;尹东芳;刘莉;;深低温保存羊膜治疗严重睑球粘连的临床观察[J];国际眼科杂志;2008年06期

9 周勇;;羊膜联合角膜缘移植治疗早期中重度眼烧伤的疗效观察[J];国际眼科杂志;2009年06期

10 刘先宁;吴洁;朱秀萍;;角膜上皮干细胞缺失动物模型的方法研究[J];国际眼科杂志;2009年08期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 包煜芝;张海燕;赵燕;;早期新鲜羊膜移植治疗重症眼部碱烧伤[A];2007年贵州省医学会眼科学分会第五届第三次学术年会论文汇编[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 屈雷;组织工程化角膜上皮与内皮的构建和移植[D];西北农林科技大学;2004年

2 弥胜利;冻存山羊角膜缘干细胞构造角膜上皮移植及检测研究[D];西北农林科技大学;2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 周文君;载表皮生长因子/壳聚糖纳米粒胶联羊膜的制备及体外释药评价[D];重庆医科大学;2011年

2 陈玲;食道上皮组织工程支架的构建及其细胞相容性研究[D];宁波大学;2012年

3 计岩;胸腺素β4壳聚糖纳米粒纤维蛋白胶胶联羊膜的制备及其对NF-κB表达调节治疗兔角膜创伤[D];重庆医科大学;2013年

4 赵平;微生物转化栀子提取物的应用研究[D];黑龙江大学;2011年

5 段李歌;食药两用栀子果的差异化质量评价及主要功效成分的分离纯化[D];武汉轻工大学;2014年

  本文关键词：京尼平交联羊膜的制备、体外性能及治疗角膜碱烧伤的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：493868