小鼠单侧耳蜗损毁后耳蜗核及下丘中GAP-43表达变化的研究

发布时间：2017-07-19 07:05

  本文关键词：小鼠单侧耳蜗损毁后耳蜗核及下丘中GAP-43表达变化的研究

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【摘要】：背景 耳聋是指听觉系统中传音部分或(和)感音部分及其听觉传导通路中听神经及各级听觉中枢发生病变所引起的不同程度的听力下降,是耳科疾病三大症状之一。据世界卫生组织1996年估计,听力损失者近6亿。根据我国2006年进行的全国第2次残疾人抽样调查结果显示,听力残疾人约2004万人,言语残疾127万人,共占各类残疾人总数的27%,严重影响了人们的生活和日常工作。因此,耳聋的预防和治疗仍是耳科医师和耳科学工作者肩负的神圣使命。随着分子生物学、听力学、电生理学和耳显微外科技术的迅猛发展,对大多数传导性聋目前可通过手术治疗提高听力。但是对于感音神经性聋的治疗,仍是目前困扰耳科界的最大难题之一。感音神经性聋(sensorineural deafness, SNHL)最常见的原因是外周听觉系统中的耳蜗毛细胞丧失,引起毛细胞缺失的主要诱因是机械性听觉感受器的损伤、噪声暴露引起的内耳变化、耳毒性药物如氨基苷类抗生素引起的听觉感受器的损伤、老化期间出现的退行性变化等。这些病理变化后听觉中枢系统的改变具有某些程度的相似性,简而言之,各种原因引起的听力损失所致的听觉中枢的可塑性变化是相似的。正是由于这种可塑性的存在,为听觉剥夺的患者提供了恢复听觉功能提供了可能。现在,随着世界上老龄化人口和噪音污染日益增加,耳聋患者也逐渐增加,这迫切需要寻找一条治疗耳聋的新思路,听觉中枢的可塑性恰恰为耳科医师及耳聋患者提供了希望,进一步理解听觉中枢系统的可塑性更具有现实意义。 研究发现,听觉剥夺早期可导致听觉中枢系统在形态和功能上发生相应的适应性改变。通过研究这些改变,有助于我们进一步认识听觉中枢的功能。本实验中,建立了听觉剥夺小鼠的动物模型,并应用免疫组化观察听觉剥夺后脑干听觉中枢声信号重塑相关蛋白的变化,以达到进一步了解后天性聋对听觉中枢影响的目的。 目的 1.通过损毁耳蜗建立后天性聋动物模型,为听力损失后听觉中枢的可塑性研究提供稳定、可靠的途径。 2.通过研究小鼠单侧耳蜗损毁后耳蜗核(cochlear nucleus, CN)和下丘(inferior colliculus, IC)中生长相关蛋白.-43(growth-associated protein gap-43, GAP-43)在术后不同时间点的表达变化,探讨小鼠听觉中枢在听觉剥夺后突触的重塑和修复过程。 材料和方法 1.建立后天性聋动物模型。参照田永胜[1]等的“小鼠听觉剥夺动物模型的建立”一文中的方法建立成年小鼠听觉剥夺动物模型。选用2-3月龄的昆明小鼠30只,体重25-35g,健康、无外耳道和中耳感染,耳廓反应灵敏(河南省实验动物中心提供)。所用实验动物均无耳毒性药物使用及强噪声暴露史。按照随机原则将实验动物分为6组,分别为正常对照组和单侧耳蜗损毁后3、7、15、30、60天组,每组各5只。单侧耳蜗损毁组在大视野棱镜式手术放大镜下,用显微手术器械切除鼓室后壁,辨清耳蜗位置后,损毁耳蜗。 2.HE染色观察正常对照组和单侧耳蜗损毁组耳蜗核和下丘神经元形态的改变。 3.采用免疫组化学SP法对正常对照组和耳蜗损毁不同时间点耳蜗核和下丘GAP-43蛋白的表达进行检测,并用计算机图像分析系统定量分析。采用SPSS17.0分析软件进行统计学分析,各组间差异用单因素方差分析,两组间的比较用独立样本t检验或校正t检验,多组间的两两比较用LSD-t检验。检验水准α=0.05,P0.05,为差异有统计学意义。 结果 1.建立了稳定的听觉剥夺小鼠模型。 2.耳蜗切除组术侧耳蜗核和双侧下丘中部分神经元出现体积萎缩,突起消失,胞浆着色浅淡,核固缩、碎裂或消失。 3.小鼠单侧耳蜗损毁后3天、7天、15天,术侧耳蜗核GAP-43含量水平呈上升趋势,较正常对照组及非术侧表达升高(P0.05)；术后30天,GAP-43表达水平下降,但表达水平仍高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05),到损毁后60天,GAP-43表达水平稍高于正常对照组,差异无统计学意义(P0.05)。非术侧耳蜗核GAP-43含量水平与正常对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。 4.小鼠单侧耳蜗损毁后3天,术耳同侧和对侧下丘GAP-43表达水平较正常对照组升高,差异具有统计学意义(P0.05),术耳同侧和对侧差异也具有统计学意义(P0.05)；术后7天、15天,表达均持续上升；术后30天、60天表达逐渐下降,但术耳同侧和对侧仍高于正常对照组(P0.05),除正常组及60天组外,双耳差异有统计学意义(P0.05)。 结论 1.切除耳蜗可建立稳定可靠的听觉剥夺动物模型。 2.单侧耳蜗损毁去传入损伤后,耳蜗核和下丘核GAP-43的表达呈现出显著的动态变化过程,可能反映了脑干听觉中枢神经元在听力损失后轴突再生及突触重塑情况。
【关键词】：耳蜗损毁 听觉剥夺 耳蜗核及下丘 生长相关蛋白-43
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 目录11-12
• 中英文缩略词对照12-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-23
• 结果23-25
• 讨论25-29
• 结论29-30
• 附图30-35
• 参考文献35-37
• 综述 听觉中枢系统的可塑性相关研究37-48
• 参考文献45-48
• 个人简历及在读学位期间发表的论文48-49
• 致谢49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：561647