促血管生成素参与脉络膜新生血管生成可能的机制

发布时间：2017-07-20 02:02

  本文关键词：促血管生成素参与脉络膜新生血管生成可能的机制

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【摘要】：研究背景脉络膜新生血管(CNV)疾病主要包括年龄相关性黄斑变性（AMD）、病理性近视和眼底血管样条纹等，是引起视力损失的重要病因之一，其发生机制十分复杂，受多种因素或因子调控。缺血缺氧和Bruch膜的损伤是引发多种CNV疾病的重要病理机制。视网膜色素上皮(RPE)-Bruch膜-脉络膜毛细血管复合体完整性破坏导致血管生成因子和抑制因子的失衡，Bruch膜的破裂、脉络膜的缺血都可活化RPE细胞合成血管内皮生长因子(VEGF)及各种生长因子，导致CNV的生成。 促血管生成素(Ang)在血管的发育成熟与稳定、调控血管完整性方面具有重要意义。其中Ang-1和Ang-2与血管生成关系最为密切。Ang-1、Ang-2通过与Tie2受体结合后激活磷脂酰肌醇3-激酶（PI3-K）/苏氨酸激酶(Akt)信号通路发挥生物学作用。有研究表明Ang表达量高低与缺氧程度密切相关，在CNV的形成过程中发挥重要作用，但是具体机制尚不明确。此外，已有学者证实Ang与缺氧诱导因子-1(HIF-1)存在共同信号通路，提示其可能受HIF-1转录调控。 3-（5′-hydroxymethyl-2′-furyl）-1-benzyl indazole (YC-1)是一种具有优越抗血管生成的新物质，可抑制HIF-1表达。 目的探讨促血管生成素-1(Ang-1)和促血管生成素-2(Ang-2)在CNV生成和缺氧条件下RPE细胞中的表达及机制。 方法（1）532nm激光诱导52只（104眼）雄性黑色C57BL/6J小鼠CNV模型。取激光照射后7d、14d和28d做观察点，行荧光素眼底血管造影后在各时间点随机处死小鼠（n=2），用组织病理学观察CNV的生长情况。免疫荧光染色法检测Ang-1、Ang-2、HIF-1在CNV生成中的表达情况；（2）将人RPE细胞培养在厌氧箱中，以建立缺氧模型。按缺氧时间0h、1h、4h、12h和24h分为5组，观察Ang-1、Ang-2与HIF-1表达的变化；另取4h作观察点，按处理因素分为缺氧对照组和HIF-1抑制剂YC-1处理组，YC-1浓度分别为1μmol·L-1、10μmol·L-1和100μmol·L-1，观察抑制HIF-1后对Ang-1和Ang-2表达的影响。应用免疫荧光染色法和Western blot分别检测Ang-1、Ang-2与HIF-1蛋白的表达。采用单因素方差分析检验方法进行统计学分析。 结果（1）光凝后7d、14d和28d的光凝斑的百分率分别为58.3%（42/72）、62.5%（30/48）和46%（11/24），组织病理学检查显示光凝斑内有新生血管形成，随着时间延长，视网膜色素上皮细胞呈不同程度增生，可完全包绕CNV。免疫荧光结果显示正常情况下小鼠存在Ang-1、Ang-2与HIF-1蛋白的表达，激光光凝4d时，Ang-2与HIF-1存在共表达区域，两者均表达于光凝区、新生血管区及周围视网膜、脉络膜损伤区；激光光凝7d时Ang-1与HIF-1存在共表达区域，两者均表达于光凝区、新生血管区及周围视网膜、脉络膜损伤区。（2）在此基础上，RPE细胞体外实验结果显示，常氧条件下RPE细胞内可见Ang-2蛋白表达，未见Ang-1及HIF-1蛋白表达；缺氧条件下Ang-1和Ang-2分别与HIF-1共表达于RPE细胞胞质中。HIF-1与Ang-1在缺氧早期呈上升趋势，其中HIF-1于缺氧后4h表达最高(0.451±0.022,t=5.401,P0.05)，24h后有所下降；Ang-1于缺氧后24h表达最高（1.342±0.059,t=20.100,P0.01）；Ang-2表达几乎不变（1.542±0.129、1.621±0.131、1.574±0.146、1.624±0.027,t=0.044、0.673、0.244、0.700,均为P0.05）。浓度为1μmol·L-1、10μmol·L-1和100μmol·L-1的YC-1均可有效抑制HIF-1蛋白的表达（t=21.583、27.154、27.431,均为P0.01）。HIF-1α蛋白表达下调后，Ang-1蛋白表达也随之受到抑制（t=9.492、15.487、17.942,均为P0.05），而Ang-2蛋白表达无明显变化（t=0.859、0.178、1.565,均为P0.05）。 结论激光可成功诱导小鼠CNV模型，CNV在光凝后14d达到高峰。在早期CNV生成中Ang-2与HIF-1存在共表达区域，，可能参与CNV生成， Ang-1与HIF-1存在共表达区域，在晚期CNV生成中可能起重要作用；在此基础上，体外实验结果提示缺氧条件下人RPE细胞表达Ang-1上调，与HIF-1存在时相关系，Ang-2无明显变化；抑制HIF-1后， Ang-1表达随之降低。以上说明在CNV生成过程中Ang-1的表达可能受HIF-1选择性调控，Ang-1与Ang-2参与了HIF-1相关的CNV生成，且参与CNV生成相关的Ang-1、Ang-2表达可能部分来源于RPE细胞。
【关键词】：脉络膜新生血管 促血管生成素-1 促血管生成素-2 缺氧诱导因子-1 色素上皮 眼
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R773.4
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 文献回顾13-20
• 1 引言20-21
• 2 材料21-22
• 3 方法22-29
• 4 结果29-34
• 5 讨论34-37
• 小结37-38
• 参考文献38-45
• 附录45-48
• 个人简历和研究成果48-49
• 致谢49-50

【参考文献】

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1 张鹏,王雨生,胡丹,吴玉丽,罗亚娟,韩泉洪,惠延年;年龄相关性黄斑变性黄斑部循环改变与脉络膜新生血管形成[J];国际眼科杂志;2003年04期

2 Toshiyuki Nakayama;Go Hatachi;Ayumi Yoshizaki;Kazuyuki Yamazumi;Daisuke Niino;Ichiro Sekine;;Expression and significance of Tie-1 and Tie-2 receptors, and angiopoietins-1,2 and 4 in colorectal adenocarcinoma:Immunohistochemical analysis and correlation with clinicopathological factors[J];World Journal of Gastroenterology;2005年07期

本文编号：565741