Connexin26基因敲除小鼠模型的建立及慢性噪声暴露的初步研究

发布时间：2017-07-26 11:28

  本文关键词：Connexin26基因敲除小鼠模型的建立及慢性噪声暴露的初步研究

  更多相关文章： 连接蛋白26 基因敲除小鼠 遗传性耳聋 基因分型 听力损伤

【摘要】：目的：为探索GJB2基因突变导致耳聋的机制及防治，我们拟建立Cx26基因敲除小鼠模型。同时初步探索慢性噪声暴露对某一发育阶段敲除Cx26的小鼠内耳的影响。 方法：1.（1）条件诱导性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：应用PCR技术鉴定两种基因改建的小鼠Cx26~(loxP/loxP)（C57/BL背景）和ROSA26~(Cre-ERT)，通过遗传学手段杂交建立Cx26条件诱导性基因敲除小鼠模型。这种小鼠是在Rosa26的基因位点插入了配体依赖Cre重组酶基因，人工合成的雌激素拮抗剂tamoxifen（TMX）能够激活Cre表达。从而切除GJB2基因位点上被loxp序列锚定的片段(2)条件性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：使用PCR技术鉴定出Cx26LoxP/LoxP小鼠（CD1背景）与Pax2·Cre小鼠，Cre随Pax2的表达于特定组织中表达，根据遗传学定律两者杂交，F2代获得条件性Cx26基因敲除小鼠（Cx26-/-；Pax2·Cre）。2.慢性噪声暴露： Cx26~(loxP/loxP);ROSA26~(Cre-ERT)小鼠在出生第15天腹腔注射TMX3mg/10g体重，小鼠出生第21天，每日暴露于100dBSPL稳态白噪声，，每天8小时，连续暴露5天。听性脑干反应检测小鼠听阈，耳蜗基底膜铺片观察毛细胞情况。 结果：基因分型结果显示我们通过遗传学手段将两种基因改建小鼠杂交，获得了Cx26条件诱导性基因敲除小鼠Cx26~(loxP/loxP);ROSA26~(Cre-ERT)和条件性Cx26~(loxP/loxP)；Pax2·Cre基因敲除小鼠。TMX注射组慢性噪声暴露后底回毛细胞损伤较单纯噪声组严重，差异有显著性。 结论：我们在本实验室中建立了两种Cx26基因敲除小鼠模型。1）时间诱导性Cx26基因敲除小鼠模型，该模型可以在耳蜗发育、内淋巴电位产生和听力形成的各个时期敲除Cx26基因。2）条件性Cx26基因敲除小鼠模型，该模型中小鼠耳蜗部分Cx26已被敲除。降低Cx26的表达增加噪声对内耳的损伤。
【关键词】：连接蛋白26 基因敲除小鼠 遗传性耳聋 基因分型 听力损伤
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 英文缩略词简表5-6
• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一部分9-20
• 前言9-12
• 材料与方法12-15
• 结果15-18
• 讨论18-20
• 第二部分20-28
• 前言20-21
• 材料与方法21-22
• 结果22-25
• 讨论25-28
• 参考文献28-33
• 综述33-43
• 参考文献40-43
• 致谢43-44

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王冰;徐洁;姚红兵;汪武;;重庆市非综合征型耳聋患儿GJB2基因突变分析[J];重庆医学;2009年09期

2 王苹,王新美,安秀芬,王宇声,杜波,杜宝东;Connexin 26基因233delC突变与中国人先天性耳聋的研究[J];耳鼻咽喉头颈外科;2001年01期

3 谢静;龚树生;;衰老与老年性耳聋[J];国际耳鼻咽喉头颈外科杂志;2006年06期

4 郑旭青;代天星;林晓敏;熊浩;杨海弟;;KCNJ10通道蛋白在C57BL/6J小鼠耳蜗的年龄相关性表达及与听力关系[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2013年08期

5 李巍巍;任丽娜;张丽丽;;缝隙连接蛋白43在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义[J];大连医科大学学报;2013年05期

6 H.麦尔;T.列纳;M.缇雪;J.M.米勒;;一种预防噪声导致失聪的新方法(英文)[J];解放军医学杂志;2009年05期

7 Inger Uhlen;;Cochlear homeostasis and its role in genetic deafness[J];Journal of Otology;2009年01期

8 Donald Henderson;;Ototoxicity of styrene[J];Journal of Otology;2011年02期

9 吴喜利;叶冰玉;安鹏;乔成林;石兴民;付荣国;;祛风通络方对肾小球系膜细胞间隙连接蛋白36及基因表达的影响[J];四川大学学报(医学版);2014年02期

10 吴雄辉;孙虹;;超氧化物歧化酶与氧化应激相关内耳疾病的研究进展[J];现代生物医学进展;2010年15期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 熊浩;快速耳蜗损伤小鼠模型的建立及应用[D];华中科技大学;2011年

2 吴雄辉;非病毒型载体介导SOD1基因体外细胞转染及表达的实验研究[D];中南大学;2011年

3 吴涛;敲除KCNJ10钾离子通道使耳蜗电位消失[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年

4 于飞;非综合征型耳聋患者GJB2基因突变筛查和全频谱突变图谱绘制[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年

5 袁永一;中国人重度—极重度耳聋分子流行病学及致病机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年

6 孙R

本文编号：576176