树枝状大分子聚合物包载sh-miR-34a抗恶性黑素瘤增殖作用研究

发布时间：2017-03-26 02:06

  本文关键词：树枝状大分子聚合物包载sh-miR-34a抗恶性黑素瘤增殖作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是一种由黑色素细胞引起进而累及全身的恶性肿瘤,其转移发生较早、死亡率较高。目前在我国,恶性黑色素瘤的发病率呈现出逐年上升的趋势。由于相关知识的缺乏,患者在就诊时往往病情已经恶化,因此黑素瘤的治疗结果并不理想。临床上传统治疗恶性黑素瘤的方法包括手术和化疗等,如何利用新技术克服传统治疗过程中存在的副作用大、患者顺应性差等难题是目前研究的热点。同时近年来,随着人们对肿瘤相关发病机制研究的不断深入以及基因工程技术和分子生物学的发展,针对恶性黑素瘤基因治疗的研究逐渐成为恶性黑素瘤治疗领域的热门。基因治疗利用外源正常基因,将其导入基因缺陷和异常的生物体内,进而达到治疗的目的。本课题利用树枝状大分子材料聚酰胺-胺(PAMAM)作为非病毒载体材料,采用可以表达miR-34a的质粒sh-miR-34a作为基因药物,应用RNAi技术研究恶性黑素瘤的治疗方案。研究利用静电复合原理构建PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物,对其粒径和电位进行表征后发现在N/P=20时,PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物的粒径为180 nm左右,电位为30 mV左右。琼脂糖凝胶电泳显示PAMAM在N/P=5时可以有效包裹基因药物sh-miR-34a。随后在体外细胞水平对PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物的抗肿瘤作用进行了考察。摄取实验发现A375细胞对PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物的摄取高达80%以上。CCK8实验显示PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物可以在体外有效抑制A375细胞的增殖,A375细胞的存活率仅为61.2±2.5%。细胞迁移和侵袭实验结果显示A375细胞的迁移和侵袭可以被PAMAM/sh-mi R-34a纳米复合物有效抑制。本研究最后在体内对PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物的抗肿瘤作用进行了考察。利用皮下注射法构建了A375裸鼠移植瘤模型,通过尾静脉注射给药的方式考察了PAMAM/sh-miR-34a纳米复合物的体内作用,结果发现PAMAM/sh-miR-34a在体内也可以抑制A375移植瘤的生长,PAMAM/sh-miR-34a组实验结束后的肿瘤体积仅为对照组的74.8%,肿瘤质量仅为对照组的66.9%。通过本课题的研究,成功构建了PAMAM/sh-miR-34a纳米给药系统,详细表征了其电位、粒径、包裹能力以及体外抗A375细胞增殖作用,sh-miR-34a抑制A375细胞生长的机制为抑制磷酸化的蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases)ERK1和ERK2以及磷酸化的AKT激酶。体内实验结果也表明sh-miR-34a在荷瘤裸鼠体内也有较为理想的抑瘤作用。
【关键词】：恶性黑素瘤 树枝状大分子 基因治疗 sh-miR-34a 纳米给药系统
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-20
• 结果20-24
• 附图24-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-39
• 综述 非病毒类载体材料靶向治疗黑色素瘤研究进展39-48
• 参考文献46-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 李宁;吉晓滨;谢景华;刘启才;;喉癌来源黑色素瘤抗原A3在小鼠黑色素瘤细胞模型的表达[J];中国免疫学杂志;2014年11期

2 温斯健;孙建方;;黑素瘤生物标志物的研究进展[J];国际皮肤性病学杂志;2014年04期

3 沈楠;朱宏;;药物载体PAMAM树状大分子的毒理[J];材料导报;2012年19期

4 李薇薇;涂平;汪e

本文编号：268095