MrgC受体调制慢性吗啡诱发大鼠DRG神经元痛介质上调的研究

发布时间：2017-03-30 22:12

  本文关键词：MrgC受体调制慢性吗啡诱发大鼠DRG神经元痛介质上调的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：Mrg受体(Mas-related gene receptors)已被证实其激活可抑制或翻转吗啡耐受的形成。研究指出,基质金属蛋白酶9 (matrix metalloproteinase-9, MMP-9)、CX3CL1 (Chemokine (C-X3-C motif) ligand 1, CX3CL1)、CCL2 (chemokine (C-C motif) ligand 2, CCL2)、白细胞介素-1β (interleukin 1β, IL-1β)参与了慢性吗啡作用诱导的反应,但其细胞内信号转导机制仍不是很清楚。本文旨在指出,MrgC受体通过背根神经节(dorsal root ganglia, DRG)神经元上MMP-9. CX3CL1、CCL2、IL-1β这些痛介质调节吗啡耐受的细胞内机制。本实验采用在体鞘内注射药物,离体组织培养,免疫组织化学荧光染色和实时荧光定量PCR (quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)等实验技术研究了：(1)鞘内隔天联合注射MrgC受体激动剂牛肾上腺髓质素8-22(bovine adrenal medulla peptide 8-22, BAM8-22)和吗啡对大鼠吗啡耐受形成过程热痛觉反射时的影响和对大鼠DRG中MMP-9、CX3CL1、IL-1β蛋白表达的影响；(2)体外离体培养DRG,吗啡作用时间不同及激活MrgC受体对DRG中MMP-9、CX3CL1、L-1β mRNA表达的影响；(3)离体培养DRG, MrgC受体的抗体对慢性应用吗啡诱导的DRG中MMP-9、CX3CL1、IL-1β mRNA表达的影响；(4)离体培养DRG, MrgC受体不同激活时间对慢性吗啡诱导的DRG中MMP-9、CX3CL1、CCL2、IL-1β mRNA表达的影响。结果显示：(1)鞘内连续6d注射20μg吗啡,并在第1、3、5 d联合注射1 nmol MrgC受体激动剂BAM8-22可抑制吗啡耐受的形成,恢复吗啡抗伤害性效力；(2)吗啡耐受使DRG中、小型神经元中MMP-9、CX3CL1和IL-1β蛋白表达均增多,鞘内联合注射1nmol BAM8-22可抑制吗啡耐受诱导的MMP-9、CX3CL1和IL-1β蛋白表达增加；(3)BAM8-22作用1h可以逆转慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9、CX3CL1和IL-1β mRNA表达量上调；(4)运用MrgC受体的抗体后,再用BAM8-22无法激活MrgC受体,因而使慢性吗啡应用后DRG中MMP-9、 CX3CL1、IL-1β这些痛介质的表达显著增加,但与慢性吗啡组比无显著差异。单纯阻断MrgC受体并不改变慢性吗啡作用；(5)BAM8-22作用24 h激活MrgC受体可以逆转慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9、CX3CL1、CCL2和IL-1β mRNA表达量上调；(6)BAM8-22作用72 h激活MrgC受体可以促进慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9、CX3CL1、CCL2和IL-1β mRNA表达量进一步上调。上述结果表明,短期内激活MrgC受体可以抑制或是翻转吗啡耐受的形成,但长期连续激活MrgC受体可以促进慢性吗啡作用。DRG中MMP-9、CX3CL1、CCL2、 IL-1β是MrgC受体调节吗啡耐受的细胞内机制。这些痛介质通过细胞内相关信号通路传递信息产生吗啡耐受。
【关键词】：慢性吗啡 DRG MrgC受体 BAM8-22 MMP-9 CX3CL1 CCL2 IL-1β
【学位授予单位】：福建师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-6
• 中文文痛6-12
• 绪论12-28
• 第一章 鞘内注射BAM8-22对吗啡耐受诱导的DRG神经元中MMP-9、CX3CL1和IL-1β表达的作用28-42
• 1.1 前言28
• 1.2 实验材料28-30
• 1.2.1 实验动物28-29
• 1.2.2 主要实验仪器和器材29
• 1.2.3 主要实验试剂29
• 1.2.4 溶剂配制29-30
• 1.3 实验方法及步骤30-31
• 1.4 图片分析与统计31-32
• 1.5 实验结果32-39
• 1.5.1 BAM8-22激活MrgC受体对吗啡耐受大鼠热痛甩尾反射行为的影响32-33
• 1.5.2 BAM8-22对吗啡耐受诱导的DRG神经元中MMP-9表达的影响33-35
• 1.5.3 BAM8-22对吗啡耐受诱导的DRG神经元中CX3CL1表达的影响35-37
• 1.5.4 BAM8-22对吗啡耐受诱导的DRG神经元中IL-1β表达的影响37-39
• 1.6 讨论39-42
• 第二章 激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9、CX3CL1和IL-1β表达的影响42-60
• 2.1 前言42
• 2.2 实验材料42-44
• 2.2.1 实验动物42
• 2.2.2 实验仪器与器材42-43
• 2.2.3 主要实验试剂43
• 2.2.4 溶液配制43-44
• 2.2.5 引物序列44
• 2.3 实验方法及步骤44-47
• 2.3.1 实验分组44
• 2.3.2 DRG离体培养44-45
• 2.3.3 总RNA提取和逆转录45-46
• 2.3.4 qRT-PCR检测离体DRG中MMP-9 mRNA表达量46-47
• 2.3.5 实验数据处理及分析47
• 2.4 实验结果47-58
• 2.4.1 RNA完整性检测结果47-48
• 2.4.2 引物特异性检测结果48-50
• 2.4.3 吗啡作用1d、3d、5d对离体培养DRG中MMP-9表达的影响50-51
• 2.4.4 BAM8-22作用20min、40min、60min对慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9表达的影响51-52
• 2.4.5 MrgC受体的抗体对慢性吗啡诱导的离体DRG中CXCL1、MMP-9和IL-1β表达的影响52-55
• 2.4.6 激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9表达的影响55-56
• 2.4.7 激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中CX3CL1表达的影响56-57
• 2.4.8 激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中比1L-Iβ表达的影响57-58
• 2.5 讨论58-60
• 第三章 MrgC受体不同激活时间对慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9、CX3CL1、CCL2和IL-1β表达的影响60-74
• 3.1 前言60
• 3.2 实验材料60-61
• 3.2.1 实验动物60-61
• 3.2.2 实验仪器与器材61
• 3.2.3 主要实验试剂61
• 3.2.4 引物序列61
• 3.3 实验方法及步骤61-62
• 3.3.1 实验分组61
• 3.3.2 样品采集61
• 3.3.3 DRG离体培养61
• 3.3.4 RNA提取与逆转录61-62
• 3.3.5 qRT-PCR测定离体DRG中MMP-9、CX3CL1、CCL2和IL-1β的表达量62
• 3.3.6 实验数据处理及分析62
• 3.4 实验结果62-71
• 3.4.1 引物特异性检测结果62-63
• 3.4.2 BAM8-22作用24h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中CX3CL63-64
• 3.4.3 BAM8-22作用24h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中CCL2表达的影响64-65
• 3.4.4 BAM8-22作用24h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中IL-1β表达的影响65-66
• 3.4.5 BAM8-22作用24h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9表达的影响66-67
• 3.4.6 BAM8-22作用72h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中CX3CL67-68
• 3.4.7 BAM8-22作用72h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中CCL2表达的影响68-69
• 3.4.8 BAM8-22作用72h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中IL-1β表达的影响69-70
• 3.4.9 BAM8-22作用72h激活MrgC受体对慢性吗啡诱导的离体DRG中MMP-9表达的影响70-71
• 3.5 讨论71-74
• 第四章 结论74-76
• 附录76-78
• 参考文献78-88
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果88-90
• 致谢90-92
• 个人简历92-95

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1 林铭燕;MrgC受体调制慢性吗啡诱发大鼠DRG神经元痛介质上调的研究[D];福建师范大学;2015年

2 李琦;肾上腺髓质素参与吗啡耐受的产生和MrgC受体对吗啡耐受的调制的研究[D];福建师范大学;2015年

  本文关键词：MrgC受体调制慢性吗啡诱发大鼠DRG神经元痛介质上调的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：278201