蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp的影响

发布时间：2017-04-01 19:02

  本文关键词：蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨蒽醌类化合物T20对拟缺血性损伤后大鼠脑微血管内皮细胞(Rat Brain Microvascular Endothelial Cells,rBMECs)上P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响及其作用机制。方法:1、采用原代培养的方法培养rBMECs和神经胶质细胞,用MTT法检测化合物T20对rBMECs增殖的影响;运用Transwell建立rBMECs和神经胶质细胞共培养体系,在共培养体系内室加入化合物T20,测定外室、内室罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)的表观渗透系数(Apparent Permeability Coefficient,Papp)以反映rBMECs上P-gp功能的变化;测定外室荧光素钠(Fluorescein Sodium Injection,NaF)的Papp以确保rBMECs紧密连结的完整性;采用Western Blot法测定T20对正常培养条件下rBMECs上P-gp表达的影响。2、用MTT法检测不同浓度的Na_2S_2O_4对原代培养的神经胶质细胞损伤6小时的存活率,Na_2S_2O_4作用于共培养体系外室的神经胶质细胞,测定外室、内室Rh123及外室NaF的Papp值;在共培养体系外室加入Na_2S_2O_4内室加入化合物T20,测定外室、内室Rh123及外室NaF的Papp值;采用Western Blot法测定T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp表达的影响。3、用MTT法检测不同浓度的PD(PD98059,MEK抑制剂)、PDTC(Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate,NF-κB活化抑制剂)和ZnPP(Zinc protoporphyrin,HO-1抑制剂)对rBMECs增殖的影响,在共培养体系外室加入阿司匹林(Aspirin,ASA)、内室加入化合物T20或PD、PDTC、ZnPP,测定外室、内室Rh123及外室NaF的Papp值;采用Western Blot法测定神经胶质细胞中TNF-α,rBMECs中p-ERK、p-IκB-α、HO-1和P-gp的变化。结果:1、蒽醌类化合物T20能够浓度依赖性的下调rBMECs上P-gp的功能和表达。2、终浓度为3.75mM的Na_2S_2O_4损伤神经胶质细胞后可上调rBMECs上P-gp的功能;蒽醌类化合物T20能够浓度依赖性的下调拟缺血损伤后rBMECs上P-gp的功能和表达。3、蒽醌类化合物T20通过抑制神经胶质细胞中TNF-α的表达,抑制rBMECs上p-ERK、p-IκB-α和HO-1的表达,进而下调P-gp的功能和表达。结论:蒽醌类化合物T20能够下调拟缺血损伤后神经胶质细胞上TNF-α表达,抑制rBMECs上的MAPK/ERK和NF-κB的激活,进而下调HO-1的表达以调控P-gp的功能和表达。
【关键词】：P-gp TNF-α MAPK/ERK NF-κB HO-1
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 前言11-13
• 第一部分 蒽醌类化合物T20对正常培养条件下rBMECs上P-gp的影响13-29
• 1 引言13
• 2 实验材料13-18
• 2.1 试剂与溶液13-17
• 2.2 主要仪器17-18
• 3 实验方法18-22
• 3.1 rBMECs、神经胶质细胞的培养18
• 3.1.1 rBMECs的分离与培养18
• 3.1.2 神经胶质细胞的培养18
• 3.2 rBMECs-神经胶质细胞共培养体系的建立18
• 3.3 蒽醌类化合物T20对rBMECs和神经胶质细胞增殖的影响18-19
• 3.4 蒽醌类化合物T20对正常培养条件下rBMECs上P-gp功能的影响19-20
• 3.5 蒽醌类化合物T20对正常培养条件下rBMECs上P-gp表达的影响20-22
• 3.6 统计学分析22
• 4 结果22-26
• 4.1 rBMECs-神经胶质细胞共培养体系的建立22-23
• 4.2 蒽醌类化合物T20对rBMECs和神经胶质细胞增殖的影响23
• 4.3 蒽醌类化合物T20对正常培养条件下rBMECs上P-gp功能的影响23-25
• 4.4 蒽醌类化合物T20对正常培养条件下rBMECs上P-gp表达的影响25-26
• 5 讨论26-28
• 6 小结28-29
• 第二部分 蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp的影响29-43
• 1 引言29
• 2 实验材料29-30
• 2.1 试剂及主要溶液的配制29
• 2.2 主要仪器29-30
• 3 试验方法30-33
• 3.1 建立Na_2S_2O_4损伤神经胶质细胞的拟缺血损伤模型30-31
• 3.1.1 Na_2S_2O_4对神经胶质细胞存活率的影响30
• 3.1.2 拟缺血损伤后rBMECs上P-gp功能变化30-31
• 3.1.3 拟缺血损伤后神经胶质细胞中炎症因子的变化31
• 3.2 阿司匹林对神经胶质细胞增殖的影响31
• 3.3 蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp功能的影响31-32
• 3.4 蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp表达的影响32
• 3.5 统计学分析32-33
• 4 结果33-40
• 4.1 建立Na_2S_2O_4损伤神经胶质细胞的拟缺血损伤模型33-36
• 4.1.1 Na_2S_2O_4对神经胶质细胞存活率的影响33
• 4.1.2 不同浓度的 Na_2S_2O_4 对 rBMECs-神经胶质细胞共培养体系 TEER 值的影响33-34
• 4.1.3 拟缺血损伤后 rBMECs 上 P-gp 功能的变化34-36
• 4.1.4 拟缺血损伤后神经胶质细胞中炎症因子的变化36
• 4.2 阿司匹林对神经胶质细胞增殖的影响36-37
• 4.3 蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp功能的影响37-39
• 4.4 蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp表达的影响39-40
• 5 讨论40-42
• 6 小结42-43
• 第三部分 蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp影响的机制研究43-61
• 1 引言43
• 2 实验材料43-44
• 2.1 试剂及主要溶液的配制43
• 2.2 主要仪器43-44
• 3 试验方法44-47
• 3.1 PD、PDTC和ZnPP对rBMECs增殖的影响44
• 3.2 PD、PDTC和ZnPP对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp功能的影响44-45
• 3.3 相关因子表达的测定45-46
• 3.4 统计学分析46-47
• 4 结果47-57
• 4.1 PD、PDTC和ZnPP对rBMECs增殖的影响47-48
• 4.2 阿司匹林对拟缺血性损伤后神经胶质细胞及rBMECs上相关因子的影响48-50
• 4.3 PD、PDTC和ZnPP对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp功能的影响50-54
• 4.4 PD、PDTC和ZnPP对拟缺血损伤后rBMECs相关因子的影响54-57
• 5 讨论57-60
• 6 小结60-61
• 第四部分 文献综述 炎症反应与脑中风61-67
• 参考文献67-76
• 附录76-78
• 致谢78-79

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张凤;孙连娜;陈万生;;蒽醌类化合物测定的研究进展[J];国外医药(植物药分册);2008年06期

2 郭华;侯冬岩;回瑞华;;分光光度法测定中药中蒽醌类化合物的含量[J];药物分析杂志;2009年02期

3 王铁华;滕义生;王立;;药物中蒽醌类化合物的定量分析[J];中国现代药物应用;2009年13期

4 李培;陈少明;;超声波辅助萃取芦荟中蒽醌类化合物工艺研究[J];安徽农业科学;2010年11期

5 郑言博;马卓;;蒽醌类化合物抗菌与抗肿瘤活性的研究进展[J];湖北中医杂志;2012年02期

6 张齐雄;曹蓓;;蒽醌类化合物生物活性研究现状与展望[J];北方药学;2012年03期

7 杜上鉴;;蒽醌类化合物在某些病理状态下的构效关系[J];国外药学(植物药分册);1981年01期

8 李广云;沈德福;张秀平;黄美玉;连惟能;王才中;;2, 6-二脒基蒽醌类化合物的合成及其抗阿米巴作用[J];中国医药工业杂志;1989年01期

9 叶伊兵,张小华,李涵;芦荟中蒽醌类化合物的提取、分离与结构鉴定[J];中国民族民间医药杂志;1999年02期

10 陈安家;陈晓峰;李进冉;李霞;李青山;胡之德;;微乳液毛细管电动色谱法对匙鄂木中蒽醌类化合物的分离测定(英文)[J];兰州大学学报(自然科学版);2008年06期

中国重要会议论文全文数据库 前3条

1 刁全平;郭华;回瑞华;侯冬岩;;HPLC法测定大黄配伍肉桂后水煎液中蒽醌类化合物含量变化[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第02分会：分离分析及微、纳流控新方法[C];2014年

2 高晓燕;姜勇;卢建秋;屠鹏飞;;HPLC-DAD法同时测定大黄中7个蒽醌类化合物的含量[A];2008年《药物分析杂志》第三届普析通用杯论文集[C];2008年

3 陈晓飞;;决明子中蒽醌类化合物的研究进展[A];2009浙江省中药学术年会论文集[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 潘晓丽;大黄中蒽醌类化合物金属配合物的合成、表征及生物活性研究[D];成都中医药大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王颖;蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp的影响[D];河南大学;2016年

2 关小凡;Sphingomonas xenophaga QYY和Rhodococcus pyridinivorans GF3降解蒽醌类化合物特性研究[D];大连理工大学;2014年

3 郑言博;蒽醌类化合物抗菌及抗肿瘤生物活性的研究[D];湖北工业大学;2012年

4 李守君;大黄蒽醌类化合物与牛血清白蛋白相互作用的电化学/光谱性质研究[D];东北师范大学;2007年

5 胡观明;蒽醌类化合物的合成及对肿瘤细胞的细胞毒活性的研究[D];兰州大学;2014年

6 刘太平;芦荟中蒽醌类化合物的提取、分离及纯化工艺研究[D];中南大学;2008年

7 薛鹏喜;穗花大黄中蒽醌类化合物的提取工艺研究[D];西南交通大学;2012年

8 蒋慧娴;中药制剂及体液中葱醒类化合物的新型萃取检测方法研究[D];河北大学;2011年

9 周启银;匙萼木中蒽醌类化合物体外抗肿瘤活性研究[D];西北师范大学;2009年

10 乔赛男;中药大黄及其有效成分的荧光光谱研究[D];河北师范大学;2007年

  本文关键词：蒽醌类化合物T20对拟缺血损伤后rBMECs上P-gp的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：281101