骨髓间充质干细胞来源的肌肉微细胞球炎症模型的构建

发布时间：2022-01-07 18:34

　　在长期药物筛选的实践中,常用的动物筛选模型虽然可以直观的反应药物疗效与不良反应。但由于动物样本的特殊性,导致动物模型在药物筛选过程中暴露出效率低、成本高等缺点。传统的细胞筛选模型虽然有效的解决了动物筛选模型效率低下等问题,但由于二维平面培养的细胞无法模拟体内真实环境,导致药物作用结果往往与体内实验相差较大,不能反应实际药效。成体干细胞（Adult stem cells,ASCs）来源广泛,是目前组织工程与细胞治疗理想的种子细胞。三维细胞培养技术可以真实模拟体内微环境,有效解决二维平面培养的细胞与体内真实环境差异大的问题。因此,本论文以骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）为模型,通过定向分化技术获得目标细胞,并通过3D培养制备细胞微球,并以脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）为致炎诱导剂,构建细胞微球炎症模型。以期该模型在药物筛选中获得潜在的应用前景。首先,制备定向分化表达载体质粒,同时研究BMSCs生物学特性。通过基因工程技术,以自剪切2A肽为连接元件构建成肌分化表达载体质粒与内皮分化表达载体质粒,质粒双酶切结果与测序... 

【文章来源】：华侨大学福建省

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

iPSCs在药物筛选中的应用示意图[41]

第1章绪论9制备性能稳定的内皮-肌肉微细胞团。考察微细胞团内细胞间相互作用以及3D培养条件对各细胞基因表达水平的影响。4、内皮-肌肉微细胞团炎症模型构建（1）以LPS为诱导剂刺激内皮-肌肉微细胞团，探索LPS对于细胞微团的最佳致炎条件，制备细胞微团炎症模型并进行表征。（2）以GBA为消炎药物模型，考察消炎药物对于构建的细胞微团炎症模型的影响。图1.2课题研究示意图Fig.1.2Schematicillustrationsofthestudy1.4本论文特色与创新之处（1）构建BMSCs来源的成肌细胞与内皮细胞作为自体来源的种子细胞。（2）运用3D悬浮共培养技术，制备BMSCs来源的肌肉微细胞球，模拟肌肉组织在体内的真实微环境，并应用于药物筛选的研究。

第2章BMSCs培养与分化表达载体构建20图2.1BMSCs细胞形态图Fig.2.1CellmorphologyofBMSCsBMSCs生长曲线如图2.2所示，细胞生长总体呈现“S”形生长趋势，细胞传代培养第4d进入对数生长期，期间细胞增殖迅速，第7d左右达到平台期，之后细胞增殖减缓。该生长趋势符合一般细胞生长规律，说明细胞复苏后生长状态良好。同时，培养过程中发现随着细胞传代次数的增多，较高代数细胞增值能力、细胞活性均大幅下降。因此，后续实验选择较低代数且处于对数生长期的BMSCs。图2.2BMSCs生长曲线图Fig.2.2ThegrowthcurveofBMSCs

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3575052