3-溴丙酮酸对乳腺癌细胞的细胞毒性依赖于MCT1表达
发布时间：2022-01-08 18:19
背景:即使在氧气充足的情况下,肿瘤细胞更偏好于使用糖酵解来产生能量,这一现象被称为瓦博格效应。作为丙酮酸类似物,3-溴丙酮酸（3-bromopyruvate,3-Br PA）可抑制肿瘤细胞中的糖酵解并诱导细胞死亡。单羧酸转运蛋白1（Monocarboxylate transporter 1,MCT1）是一种膜蛋白,可以转运乳酸、丙酮酸和其他一元羧酸。然而,MCT1在3-Br PA的抗肿瘤作用中的作用需深入探讨。本研究中我们着重于确定3-Br PA在乳腺癌细胞中的细胞毒性并评估MCT1对这种效应的可能作用。目的:1.观察3-Br PA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用。2.探究3-Br PA对乳腺癌细胞凋亡的影响。3.探寻MCT1在3-Br PA诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用。方法:1.免疫组化和Western blotting分别检测人乳腺癌组织和多株乳腺癌细胞中己糖激酶Ⅱ（HexokinaseⅡ,HKⅡ）的表达情况。2.通过MTT法检测3-Br PA对多株乳腺癌细胞的增殖抑制作用。3.Western blotting法检测多株乳腺癌细胞中MCTs的表达情况。4.使用MCT1小分子抑制剂AZD39...
【文章来源】：蚌埠医学院安徽省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蛋白定量标准曲线
结果1. HKⅡ在乳腺癌组织和细胞呈高表达HKⅡ是催化糖代谢过程中的首个限速酶，其高表达能够增加糖酵解速率[32]。因此，我们测定了 HKⅡ在乳腺癌标本和多株细胞中的表达情况。IHC 实验表明，相比于正常组织，乳腺癌组织中的 HKⅡ显著高表达，且 HKⅡ是表达在细胞质中的，见图 2a。使用 Western blotting 对正常乳腺上皮细胞和八株癌细胞的中 HKⅡ表达情况进行了测定，实验表明：八株癌细胞中的 HKⅡ表达是明显高于正常的上皮细胞 MCF-10A 中 HKⅡ的表达，见图 2b。这些结果表明乳腺癌细胞的能量代谢可能是失调的，同时 HKⅡ高表达也为 3-BrPA 提供了治疗基础。
图 3. 3-BrPA 对乳腺癌细胞毒性作用与 MCT1 相关Figure 3. The inhibitory effect of 3-BrPA on breast cancer depends on MCT1. (a) Breast cancer cellswere treated with different concentrations of 3-BrPA for 24 h. MTT assay was used to determine cellsurvival rate. Data are expressed as mean ± SEM of three independent experiments. (b) Theexpression of MCT1, MCT2, MCT3, and MCT4 was determine d by western blotting using totalprotein isolated from breast cancer cell lines. β-actin was used as an internal control. (c) Theinhibitory effect of AZD3965 in breast cancer cells with high MCT1 expression was measured. (d)Breast cancer cell lines as indicated were treated with 0.1 μM AZD3965 combined with varyingconcentrations of 3-BrPA for 24 h. Data are expressed as mean ± SEM at three independentexperiments. *P < 0.05.3. 3-BrPA 对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响为了更深入的研究，我们选取四株乳腺癌细胞用于后续实验，两株（CAL-51和MCF-7）对3-BrPA 敏感的细胞，两株（MDA-MB-231和MDA-MB-453）对3-BrPA不敏感的细胞。我们观察了不同浓度的 3-BrPA 作用于细胞 24 h，48 h，72 h 后其
【参考文献】：
期刊论文
[1]人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡[J]. 石雪萍,李静,冉建华,熊伟,李海星,郭珮,陈地龙. 中国药理学通报. 2017(01)
[2]葡萄糖转运蛋白1与肿瘤能量代谢关系的研究进展[J]. 余苏云,刘兆国,贾琦,陈力川,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵. 中国药理学通报. 2016(07)
本文编号：3577048
【文章来源】：蚌埠医学院安徽省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
蛋白定量标准曲线
结果1. HKⅡ在乳腺癌组织和细胞呈高表达HKⅡ是催化糖代谢过程中的首个限速酶，其高表达能够增加糖酵解速率[32]。因此，我们测定了 HKⅡ在乳腺癌标本和多株细胞中的表达情况。IHC 实验表明，相比于正常组织，乳腺癌组织中的 HKⅡ显著高表达，且 HKⅡ是表达在细胞质中的，见图 2a。使用 Western blotting 对正常乳腺上皮细胞和八株癌细胞的中 HKⅡ表达情况进行了测定，实验表明：八株癌细胞中的 HKⅡ表达是明显高于正常的上皮细胞 MCF-10A 中 HKⅡ的表达，见图 2b。这些结果表明乳腺癌细胞的能量代谢可能是失调的，同时 HKⅡ高表达也为 3-BrPA 提供了治疗基础。
图 3. 3-BrPA 对乳腺癌细胞毒性作用与 MCT1 相关Figure 3. The inhibitory effect of 3-BrPA on breast cancer depends on MCT1. (a) Breast cancer cellswere treated with different concentrations of 3-BrPA for 24 h. MTT assay was used to determine cellsurvival rate. Data are expressed as mean ± SEM of three independent experiments. (b) Theexpression of MCT1, MCT2, MCT3, and MCT4 was determine d by western blotting using totalprotein isolated from breast cancer cell lines. β-actin was used as an internal control. (c) Theinhibitory effect of AZD3965 in breast cancer cells with high MCT1 expression was measured. (d)Breast cancer cell lines as indicated were treated with 0.1 μM AZD3965 combined with varyingconcentrations of 3-BrPA for 24 h. Data are expressed as mean ± SEM at three independentexperiments. *P < 0.05.3. 3-BrPA 对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响为了更深入的研究，我们选取四株乳腺癌细胞用于后续实验，两株（CAL-51和MCF-7）对3-BrPA 敏感的细胞，两株（MDA-MB-231和MDA-MB-453）对3-BrPA不敏感的细胞。我们观察了不同浓度的 3-BrPA 作用于细胞 24 h，48 h，72 h 后其
【参考文献】：
期刊论文
[1]人参皂苷Rh2调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡[J]. 石雪萍,李静,冉建华,熊伟,李海星,郭珮,陈地龙. 中国药理学通报. 2017(01)
[2]葡萄糖转运蛋白1与肿瘤能量代谢关系的研究进展[J]. 余苏云,刘兆国,贾琦,陈力川,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵. 中国药理学通报. 2016(07)
本文编号：3577048
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