抗皮肤衰老短肽PSN的分子设计及作用机制

发布时间：2022-01-15 06:41

　　皮肤衰老是机体衰老最直接的外在表现,是由内源性变化和外源性损伤共同引起的自然过程。皮肤细胞衰老后,各项生理机能将发生改变,如线粒体功能紊乱、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量增加、炎症反应增强、I型胶原蛋白（Collagen I,COL-1）)表达减少,最终导致皮肤松弛、皱纹加深、老年斑形成等现象,严重影响了人体的美观和健康,因此如何延缓皮肤衰老已经成为抗衰老领域的研究热点。近年来,生物短肽类抗衰老制剂因其不良反应少、稳定性好等优点得到了人们的广泛关注,但由于分子量较大、生物利用率不高等原因限制了其应用。另外,人们在多种模式生物的实验中发现,抑制AKT/mTOR通路可以延长模式生物的寿命,但其能否调控皮肤衰老仍有待进一步探索。本论文以清除ROS积累为出发点,以降低抗衰老短肽分子量和促进胶原蛋白合成为研究思路进行分子设计,目的是设计一种安全稳定、分子量小的抗皮肤衰老短肽。首先从本实验室前期天然活性肽库中选取四条最初的抗氧化模板肽,通过氨基酸序列删减、点突变等常用分子改造手段设计优化得到九条改造肽。然后经过一系列活性实验检测,最终筛选得到促胶原蛋白表达能力... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 皮肤衰老概述
        1.1.1 细胞衰老
        1.1.2 皮肤衰老
        1.1.3 氧化应激与皮肤衰老
        1.1.4 皮肤氧化损伤及衰老相关研究模型的建立
    1.2 AKT/mTOR信号通路
    1.3 mTOR通路与衰老的关系假设
        1.3.1 自噬
        1.3.2 线粒体功能
        1.3.3 炎症
    1.4 化妆品抗皮肤衰老研究进展
        1.4.1 常见化妆品抗衰老方式及成分
        1.4.2 活性肽在抗皮肤衰老领域的进展
    1.5 研究意义
2 抗皮肤衰老短肽的分子设计及筛选
    2.1 引言
    2.2 材料与仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 抗皮肤衰老改造肽的分子设计
        2.3.2 改造短肽抗氧化活性检测
        2.3.3 改造短肽抗炎能力检测
        2.3.4 改造短肽对COL-1 启动子影响检测
        2.3.5 改造短肽细胞毒性检测
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 改造短肽的序列及理化参数
        2.4.2 改造短肽抗氧化能力结果与分析
        2.4.3 改造短肽抗炎能力结果与分析
        2.4.4 改造短肽对COL-1 报告基因影响
        2.4.5 改造短肽细胞毒性结果与分析
    2.5 本章小结
3 抗衰老短肽PSN对皮肤的保护作用
    3.1 引言
    3.2 材料与仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 PSN预防皮肤衰老能力检测
        3.3.2 PSN修复皮肤衰老能力检测
    3.4 实验结果分析
        3.4.1 PSN对衰老皮肤的预防保护作用
        3.4.2 PSN对衰老皮肤的修复作用
    3.5 本章小结
4 抗皮肤衰老短肽PSN的作用机制
    4.1 引言
    4.2 材料与仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 细胞衰老模型的构建及验证
        4.3.2 细胞衰老β-半乳糖苷酶活性测定
        4.3.3 酶联免疫吸附试验
        4.3.4 线粒体膜电位检测
        4.3.5 胞内ROS检测
        4.3.6 人皮肤成纤维细胞全蛋白提取
        4.3.7 蛋白定量
        4.3.8 Western Blotting检测相关蛋白
    4.4 实验结果分析
        4.4.1 细胞衰老模型的构建及验证
        4.4.2 PSN对衰老细胞炎症因子表达的影响
        4.4.3 PSN对衰老细胞SA-β-Gal相关活性的影响
        4.4.4 PSN对衰老细胞线粒体功能的影响
        4.4.5 PSN对 HFF-1 细胞衰老标志蛋白p16 的影响
        4.4.6 PSN对 HFF-1 细胞I型胶原蛋白合成的影响
        4.4.7 AKT/m TOR通路在PSN抗皮肤衰老中的分子机制探究
    4.5 本章小结
5 抗皮肤衰老短肽PSN毒理安全与稳定性评价
    5.1 引言
    5.2 材料与仪器
    5.3 实验方法
        5.3.1 短肽细胞毒性检测
        5.3.2 短肽溶血活性检测
        5.3.3 短肽稳定性检测
        5.3.4 短肽免疫原性检测
    5.4 实验结果分析
        5.4.1 PSN的细胞毒性和溶血性结果与分析
        5.4.2 PSN的免疫原性结果与分析
        5.4.3 PSN的稳定性结果与分析
    5.5 本章小结
结论
参考文献
附录 短肽PSN合成检测结果
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]成纤维细胞在皮肤衰老中的作用机制研究进展[J]. 江思熠,杨森,孙良丹.  实用皮肤病学杂志. 2017(02)
[2]药物安全性评价中生物标志物验证的研究进展[J]. 林志,周晓冰,吕建军,屈哲,霍桂桃,张頔,杨艳伟,王雪,李波.  药物评价研究. 2016(06)
[3]mTOR信号通路与衰老及衰老相关重大疾病[J]. 贺洁宇,刘峰.  生物化学与生物物理进展. 2014(03)
[4]活性生物多肽类化合物在皮肤美容与抗衰老化妆品中的应用研究进展[J]. 董萍,杨永鹏,郝林琳,左夏林,丁宇,尹晴,罗迎霞,朱晓亮,梁虹,丁克祥.  中国化妆品. 2014 (03)
[5]食源性蛋白中免疫活性肽的研究进展[J]. 程媛,曹慧,徐斐,于劲松.  食品科学. 2015(17)
[6]肽类在化妆品中的应用[J]. 杜登学,王姗姗,周磊.  山东轻工业学院学报(自然科学版). 2012(01)
[7]H2O2诱导体外培养的皮肤成纤维细胞氧化应激损伤[J]. 杜先华,李海燕,王爽,牛欣.  中国老年学杂志. 2011(04)
[8]皮肤抗衰老研究进展及抗衰老药物的开发前景[J]. 张亭亭,李招发,许瑞安.  医学研究杂志. 2009(12)
[9]与美容相关的皮肤结构特点[J]. 孙素姣,何黎.  中国美容医学. 2008(02)
[10]皮肤衰老的机理和影响因素[J]. 郭莉.  中国美容医学. 2001(05)



本文编号：3590111