重组TNSALP-FcD10在CHO-K1细胞的表达研究

发布时间：2024-03-08 00:54

　　背景:低碱性磷酸酯酶症(Hypophospatasia,HPP)是由于非组织特异性碱性磷酸酶(tissue nonspecific alkaline phosphatase,TNSALP)活性降低造成的罕见病。TNSALP在人体中有重要的作用,缺少时会造成人体的骨骼矿化不良,从而出现骨折等症状。2015年FDA批准重组碱性磷酸酶抗体药物(rTNSALP-FcD10)可用于治疗HPP,但目前rTNSALP-FcD10抗体药物还没有在国内上市。rTNSALP-FcD10具有延长半衰期并有利成骨细胞靶向性的特性,但其产量较低、成本高,对HPP病患者的需求及家庭产生较大负担。目的:本项目针对如上问题,查阅文献,本实验拟构建重组TNSALP的真核表达载体,试图筛选出更高效的重组表达质粒,获得能够稳定表达rTNSALP-FcD10蛋白且表达量相对较高的中国仓鼠卵巢细胞株,为今后在中国规模化生产rTNSALP-FcD10蛋白建立基础。方法:(1)去掉TNSALP分子N-末端的信号肽序列及C-末端的GPI锚定信号,并与人抗体的Fc片段和10个天冬氨酸重组成融合蛋白rTNSALP-FcD10,将rTNS...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1真核表达载体pcDNA3.1-rTNSALP-FcD10重组构建流程

验结果核表达载体的构建及鉴定了在真核细胞CHO-K1中异源表达rTNSALP-FcD10蛋白，LP-FcD10基因序列分别克隆至pcDNA3.1及pEF1/Myc-HisB表达达载体只有启动子不同，应用两个表达载体是为了能够筛选出更高载体，为后续蛋白的纯化以及....

图2真核表达载体pEF1-rTNSALP-FcD10重组构建流程

图2真核表达载体pEF1-rTNSALP-FcD10重组构建流程Fig.2ConstructionofpEF1-rTNSALP-FcD10recombinantexpressionvector重组表达载体的构建及鉴定们利用酶切的方法对重组表达载体pcDNA....

图3pcDNA3.1-rTNSALP-FcD10质粒（A）和pEF1-rTNSALP-FcD10质粒（B）双酶切验证

：DNAmarker；1：pcDNA3.1-rTNSALP-FcD10质粒；2：pEF1-rTNSALP-FcD10质pcDNA3.1-rTNSALP-FcD10质粒（A）和pEF1-rTNSALP-FcD10质粒（B）双酶切ig.3Recombinantpla....

图4RT-qPCR检测转染后细胞rTNSALP-FcD10基因在mRNA水平的表达Fig.4RT-qPCRwasusedtodetecttheexpressionofrTNSALP-FcD10geneatmRNAlevel

27图4RT-qPCR检测转染后细胞rTNSALP-FcD10基因在mRNA水平的表达Fig.4RT-qPCRwasusedtodetecttheexpressionofrTNSALP-FcD10geneatmRNAlevel注：图A表....

本文编号：3921757