肝靶向肽-人内皮抑制素融合蛋白表达条件的优化及活性鉴定

发布时间：2017-06-15 14:08

  本文关键词：肝靶向肽-人内皮抑制素融合蛋白表达条件的优化及活性鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了获得足够多纯度高且有活性的肝靶向肽-人内皮抑制素融合蛋白(HTP-r ES),首先研究了BL21/p ET21b-HTP-r ES重组菌株的生长曲线和最佳诱导时机;单因素分析不同p H值、不同诱导时间、不同诱导剂浓度、不同诱导温度时融合蛋白表达量;通过包涵体洗涤、复性、纯化,以获得高纯度的肝靶向肽-人内皮抑制素融合蛋白;最后采用流式细胞仪和MTT对融合蛋白进行活性鉴定。结果表明,BL21/p ET21b-HTP-r ES重组菌株在1.5 3.5 h处于对数生长期,培养基p H 8.0、IPTG终浓度0.06 mmol/L、42℃、诱导表达5 h为最佳表达条件。包涵体洗涤后纯度达60%,经复性、纯化后获得的目的蛋白纯度达到95%以上,对人肝癌细胞具有靶向性,能抑制人脐静脉内皮细胞的增殖。研究确立了融合蛋白最佳表达条件以及复性、纯化条件,为进一步研究其生物学活性及药物开发奠定基础。
【作者单位】： 广东药科大学基础学院广东省生物活性药物研究重点实验室;广东药科大学中药学院;
【关键词】： 肝靶向肽 人内皮抑制素 表达条件优化 活性鉴定
【基金】：国家自然科学基金(No.81502520) 广东省自然科学基金(No.2016A030310299)资助~~
【分类号】：R91
【正文快照】： Received:April 28,2016;Accepted:August 8,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(No.81502520),Natural Science Foundation of Guangdong Province(No.2016A030310299).Corresponding author:Yan Ma.Tel:+86-20-39352552;E-mail:mayan820901@126

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