细胞色素P450酶系对喹乙醇诱导的肾细胞凋亡的影响

发布时间：2017-06-17 00:11

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【摘要】：目的采用体外细胞培养系统,研究肝脏微粒体细胞色素P450同工酶对喹乙醇(OLA)毒性的影响,筛选和确定影响喹乙醇毒性的主要细胞色素P450同工酶,探索CYP450酶系选择性介导OLA-ROS-细胞凋亡途径。方法(1)以体外培养的人类肾小管上皮细胞(HK-2)作为检测OLA致肾小管毒性的细胞模型,以脏微粒体混合酶系(S9)加入到HK-2细胞培养中模拟体内代谢环境,将CYP450同工酶(CYP2D6、NADPH:P450还原酶、CYP2A、CYP3A、CYP2C、CYP2E1和CYP1A1/CYP1A2)的化学抑制剂分别加入培养体系中,造成不同P450同工酶活性抑制状况,通过细胞增殖抑制率(MTT)试验来检测OLA单独染毒或OLA与抑制剂联合染毒情况下的细胞毒性。(2)通过流式细胞仪DCF法检测各CYP450同工酶抑制剂对OLA所致HK-2细胞ROS产生情况的影响,筛选HK-2细胞内影响OLA作用的主要CYP450同工酶,推测其代谢路径。结果 (1)MTT检测发现,OLA+S9+α-萘黄酮组与OLA+S9组之间以及OLA+4-甲基吡唑+S9组与OLA+S9组之间细胞活性差异有统计学意义(P0.05),表明通过抑制CYP4501A酶以及CPY2E1活性可以使OLA的细胞毒性减轻。(2)OLA能够呈剂量依赖性的诱发细胞内ROS含量升高,且加入CYP1A抑制剂以及CPY2E1抑制剂后,可显著减少HK-2细胞ROS的产生量。结论 OLA通过CYP1A和CYP2E1的代谢诱导HK-2细胞生成ROS,进而可能诱发HK-2细胞的凋亡产生细胞毒性和肾毒性。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所毒理室中国疾病预防控制中心化学污染物与健康重点实验室;
【关键词】： 喹乙醇 人源肾小管上皮细胞 细胞色素P 活性氧
【基金】：国家自然科学基金(81273110) 卫生公益性行业科研项目(201402021) 国家科技支撑计划(2014BAI12B02)
【分类号】：R99
【正文快照】： 喹乙醇(olanquindox,OLA)是一种广泛用于畜牧生产的广谱邻硝基苯胺类抗菌药和促生长添加剂。鉴于国内外对OLA毒作用研究的不充分性和结果的差异性,其在畜牧业生产中的使用受到颇多限制。欧盟已认定OLA为致突变物和可疑致癌物,主要对肝脏、肾脏、肾上腺等器官有较明显的毒效应

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本文编号：456835