Sigma-1受体在依赖于BDNF的Trk B受体信号传导中的调控作用

发布时间：2017-06-20 07:20

  本文关键词：Sigma-1受体在依赖于BDNF的Trk B受体信号传导中的调控作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究sigma-1受体对BDNF-Trk B受体信号传导通路的调控作用并进一步探讨sigma-1受体调控作用的分子机制。方法:将Trk B受体质粒转染到HEK293T细胞24-48 h,分别给予50 ng/m L BDNF和10μM BD1063刺激,western blotting方法检测p-ERK1/2和p-GSK3β蛋白表达情况;同样,培养原代神经元,给予50 ng/m L BDNF、1μM BD1047、10μM BD1063和100 n M K252a刺激,采用western blotting方法检测p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表达情况;原代培养神经元,BD1047和BD1063阻断sigma-1受体后,检测神经元树突生长情况;Sigma-1受体基因敲除鼠原代培养的神经元给予BDNF刺激后,western blotting方法检测p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表达情况以及神经元树突生长情况;Trk B受体质粒转染到HEK293T细胞后,细胞免疫荧光染色实验观察sigma-1受体对Trk B受体内化的影响;免疫共沉淀方法,检测阻断sigma-1受体后,sigma-1受体与Trk B受体结合情况。结果:在HEK293T细胞及原代神经元中阻断sigma-1受体后,BDNF-Trk B受体下游信号通路中p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表达量减少;原代神经元中,阻断sigma-1受体后显著抑制了神经元树突生长;同样,在sigma-1受体基因敲除鼠原代神经元中,p ERK1/2和p S9-GSK3β蛋白表达受到抑制并且树突生长受到抑制;用BD1047或BD1063阻断sigma-1受体后,明显抑制了BDNF诱导的Trk B受体内化;此外,阻断sigma-1受体后,免疫共沉淀实验发现sigma-1受体与Trk B受体之间的结合减少。结论:在中枢神经系统中,BDNF-Trk B受体信号通路发挥生物学作用必须依赖于sigma-1受体的调控。
【关键词】：Sigma-1受体 Trk B受体 BDNF 内化 树突生长
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-14
• 实验材料和方法14-27
• 一、实验材料14-16
• 1.1 实验动物14
• 1.2 实验仪器设备14-15
• 1.3 实验试剂15-16
• 二、实验方法16-27
• 2.1 溶液配制16-18
• 2.2 细胞系培养18
• 2.3 原代神经元的培养18-19
• 2.4 Trk B受体质粒的构建以及表达19-22
• 2.5 Western blotting22-23
• 2.6 免疫沉淀23-24
• 2.7 细胞转染24
• 2.8 细胞免疫荧光染色24-25
• 2.9 神经元树突染色25
• 2.10 Sigma-1 受体转基因鼠基因型鉴定25-26
• 2.11 数据处理26-27
• 实验结果27-38
• 1、阻断sigma-1 受体抑制了BDNF-Trk B受体下游信号通路27-30
• 2、阻断sigma-1 受体抑制了BDNF诱导的神经元树突生长30-32
• 3、Sigma-1 受体敲除后抑制了BDNF-Trk B受体下游信号通路和生物学功能32-34
• 4、Sigma-1 受体通过调控Trk B受体内化促进BDNF-Trk B受体下游信号应答34-35
• 5、阻断Sigma-1 受体后，BDNF诱导的Sigma-1 受体与Trk B受体间的结合减弱35-38
• 讨论38-41
• 总结41-42
• 参考文献42-47
• 综述47-59
• 参考文献53-59
• 附录59-61
• 致谢61-62

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