砷暴露对As3MT基因表达及甲基化的影响

发布时间：2017-10-19 04:30

  本文关键词：砷暴露对As3MT基因表达及甲基化的影响

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【摘要】：目的：通过实时荧光定量PCR (qPCR)检测职业暴露工人和非职业性砷暴露人群尿中砷化合物形态和含量,评价其机体砷负荷情况；通过qPCR和甲基化特异性PCR (MSP),检测砷暴露对As3MT表达及甲基化的影响,以及As3MT mRNA表达量与尿砷形态和含量之间的关系。方法：采用典型抽样的方法,抽取某砒霜厂79名职业性砷暴露工人和24名砒霜厂外工人,收集其尿液样本和外周血液样本；选用HG-oldtrap-AAS法测定尿中TiAs、iAs、MMA、DMA四种形态的砷含量,并计算iAs%、MMA%、DMA%、 PMI、SMI等砷甲基化指标,分析砷暴露对As3MT mRNA表达量的影响；运用离心柱法提取外周血液样本基因组DNA,使用MSP检测砷暴露对As3MT甲基化的影响；选择t检验(t'检验),分析砷暴露对As3MT表达及甲基化的影响,选择Pearson相关(Spearman相关)分析尿砷形态及甲基化程度对As3MT mRNA表达量的影响。结果：暴露组工人尿中iAs、MMA、DMA和TiAs浓度的中位数(最小值,最大值)分别为103.52 (5.38,971.11) μg/ml、151.12 (5.84,1361.35) μg/ml、523.48 (35.73,4258.11) μg/ml和822.39 (54.28,5981.34) pg/ml,明显高于ACGIH最新制定的尿总砷生物接触限值35μg/ml。对照组工人尿中iAs、MMA、DMA和TiAs浓度的中位数(最小值,最大值)分别为1.43 (0.30,6.20) μg/ml、1.54 (0.00,3.96) μg/ml,14.14 (1.28,32.70) μg/ml和16.88 (2.69,40.07)在尿总砷生物接触限值以下。暴露组工人和对照组工人尿中iAs、MMA、DMA和TiAs浓度存在差异(P0.05)。As3MT和P53mRNA在暴露组中的表达量明显高于对照组中的表达量(P 0.05)。 As3MT的表达量与iAs、MMA、 DMA之间存在正相关关系(r=0.340,0.382,0.421), P53mRNA的表达量与iAs、MMA、DMA之间存在正相关关系(r=0.342,0.356,0.401), As3MT和P53 mRNA的表达量与PMI无相关关系(P0.05),与SMI之间存在负相关关系(r=-0.266,-0.241)。结合MSP实验结果,暴露组和对照组的非甲基化率存在差异(P0.05),暴露组的非甲基化率明显高于对照组。iAs、MMA、DMA和TiAs在非甲基化分组中的均数明显高于甲基化分组(包含部分甲基化)。结论：通过qPCR检测发现砷暴露使得As3MT mRNA的表达量升高,且砷暴露水平越高,As3MT mRNA的表达量越高,但是砷暴露后尿砷甲基化程度越深,As3MT mRNA的表达量越低。结合MSP实验结果,发现砷暴露后,砷和砷化合物的浓度越高,As3MT mRNA的表达量越高,甲基化水平越低。本次典型抽样研究中,职业性砷暴露工人体内砷与砷化合物浓度明显升高,砷暴露工人可能已经存在潜在的职业损伤。
【关键词】：As3MT 砷暴露 尿砷 甲基化
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R135
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 中英文缩略词12-13
• 1 引言13-16
• 2 材料和方法16-29
• 2.1 技术路线16-17
• 2.2 研究对象和实验材料的采集17
• 2.2.1 研究对象的选择17
• 2.2.2 实验材料的采集17
• 2.3 实验试剂和器材17-19
• 2.3.1 主要试剂和试剂盒18-19
• 2.3.2 主要实验仪器19
• 2.4 方法步骤19-29
• 2.4.1 尿砷含量的测定19-20
• 2.4.2 淋巴细胞提取20
• 2.4.3 RNA提取、逆转录及荧光定量20-23
• 2.4.4 DNA甲基化的检测23-29
• 2.5 数据处理29
• 3 结果29-39
• 3.1 研究对象一般情况29-30
• 3.2 尿砷形态荧光定量结果30-33
• 3.3 尿中iAs、MMA、DMA和TiAs水平33-36
• 3.4 As3MT和P53 mRNA的表达36-37
• 3.5 暴露组和对照组差异性检验37-38
• 3.6 暴露组中甲基化和非甲基化样本间砷化合物的差异38-39
• 4 讨论39-42
• 4.1 研究对象尿砷化合物水平的讨论40-41
• 4.2 As3MT和P53 mRNA在暴露组和非暴露组中表达差异的讨论41
• 4.3 暴露组和对照组甲基化和非甲基化结果的比较讨论41
• 4.4 暴露组中甲基化和非甲基化样本间砷化合物的差异讨论41-42
• 5 结论42-43
• 6 参考文献43-47
• 综述47-57
• 参考文献54-57
• 攻读硕士学位期间发表论文情况57-58
• 致谢58-59

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本文编号：1059053