饮水摄入三氯乙烯致小鼠肝脏损伤中PPARs表达的研究

发布时间：2017-11-02 11:24

  本文关键词：饮水摄入三氯乙烯致小鼠肝脏损伤中PPARs表达的研究

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【摘要】：研究背景三氯乙烯（trichloroethylene，TCE）是一种工业上常用的有机溶剂，广泛用作金属表面去污剂。由于被大量应用但处置能力有限，TCE已大量进入大气、土壤以及地下水系统成为一种重要的环境污染物。长期低剂量暴露于TCE可致肝毒性，同时可引起机体免疫系统的失衡。研究表明TCE经肝脏代谢后生成具有过氧化物酶体增殖物（peroxisome proliferator，，PP）特性的代谢物，继而激活PP的受体过氧化物酶体增殖物活化受体（peroxisome proliferator activated receptors，PPARs），PPARs与许多环境毒物所致的肝脏毒性及机体的免疫应答存在密切联系，但在饮水摄入TCE所致肝毒性中PPARs的表达及其作用仍不清楚。 目的本研究通过检测经饮水摄入TCE后小鼠肝脏损伤情况及肝脏中PPARs表达，探讨TCE暴露引起小鼠肝脏损伤中PPARs的表达情况以及时间和剂量效应关系，为阐明环境TCE暴露危害及其分子机制，并制定防制对策提供理论依据。 方法选取健康状况良好，体重16~20g的雌性BALB/c小鼠饲养于清洁级动物房，适应性饲养1周后随机分为空白对照组、溶剂对照组、2.5g/LTCE组和5.0g/LTCE组，TCE用终浓度不超过1%的DMSO溶解后经饮水给予。分别在第2、4、8、12周摘眼球采集外周血，经静置分离上层血清冻存备用，处死动物后取肝脏组织冻存备用。用全自动生化分析仪检测肝脏生化指标谷丙转氨酶（alanineamiotransferase，ALT），取肝脏组织制作苏木精—伊红（(hematoxylin-eosin staining，HE）染色切片，显微镜下观察评价肝脏病理改变，用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒检测肝脏促炎细胞因子白介素（interleukin，IL）-1、IL-6和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α含量；用荧光定量实时聚合酶链式反应（real time-polymerase chain reactions，RT-PCR）法检测肝脏PPARα、PPARβ和PPARγ mRNA表达情况，用免疫组织化学法对肝脏PPARα和PPARγ蛋白进行定位。数据用Spss17.0统计软件进行录入和分析。 结果 1一般情况：实验期间各时间段各组小鼠一般情况良好，未出现个体因TCE摄入而死亡的现象，各组小鼠平均饮水量和体重增长差异无统计学意义，各时间点小鼠肝脏系数组间差异无统计学意义（P＞0.05）。 2饮水摄入TCE致小鼠肝损伤情况：在2、4周，2.5g/L和5.0g/L TCE组ALT水平较对照组有所升高（P 0.05，P 0.01），在8、12周，2.5g/L、5.0g/LTCE组ALT水平有所下降，但仍高于对照组，只有5.0g/l TCE组ALT水平在8周时显著高于对照组（P 0.05，P 0.01）；组织病理学检查进一步显示TCE染毒小鼠出现肝脏细胞水肿变性、炎细胞浸润等不同程度的肝损伤改变，尤其是给予5.0g/L剂量在4周时损伤情况最为明显；对肝脏促炎因子水平检测结果显示，与对照组相比，2.5g/L和5.0g/LTCE组肝脏IL-1、IL-6、TNF-α水平均在4周时达到最高，且差异具有统计学意义（P 0.05，P 0.01），在2、8周，5.0g/LTCE组小鼠肝脏IL-6、TNF-α水平与对照组比较也明显升高（P 0.05，P 0.01），在12周时三种促炎细胞因子水平均有所下降，但仍高于对照组；相关性分析显示血清ALT水平与肝脏促炎细胞因子水平IL-1，IL-6，TNF-α水平存在显著的正相关（r=0.615，0.522，0.649，p 0.01）。 3肝脏PPARs表达情况：在4、8、12周，TCE暴露组PPARα mRNA水平显著升高，且5.0g/LTCE组上升趋势高于2.5g/LTCE组（P 0.05，P 0.01）；TCE暴露对PPARβ mRNA表达无显著影响（P＞0.05）；在4周时，TCE暴露组PPARγmRNA水平也显著上调（P 0.05），在8、12周，5.0g/L TCE组PPARγ mRNA水平高于对照组（P 0.05，P 0.01）。进一步进行免疫组化检测显示，PPARα和PPARγ在TCE染毒组小鼠肝脏组织细胞核中都有表达，且阳性细胞率均显著高于对照组（P 0.05）。 结论 1经饮水摄入TCE可致小鼠肝损伤，肝功能指标ALT及肝脏中促炎细胞因子IL-1，IL-6，TNF-α含量升高，并见明显炎细胞浸润，部分肝细胞轻度水肿，少许细胞变性或坏死。 2经饮水摄入TCE对小鼠肝脏PPARα和PPARγ表达有显著影响，可显著上调其mRNA表达水平，同时激活其蛋白表达。 3TCE饮水摄入导致的PPARα和PPARγ表达上调可能与小鼠肝脏损伤有关。
【关键词】：三氯乙烯 肝脏损伤 PPARα PPARγ
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 1 引言13-15
• 2 材料与方法15-23
• 3 结果23-38
• 4 讨论38-42
• 5 结论42
• 6 参考文献42-48
• 附录48-49
• 致谢49-50
• 综述50-60
• 参考文献56-60

【参考文献】

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本文编号：1131365