红酵母红素对氧化受损PC12细胞的保护作用

发布时间：2017-11-19 09:11

  本文关键词：红酵母红素对氧化受损PC12细胞的保护作用

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【摘要】：红酵母红素(Torularhodin)是一种具备清除自由基、淬灭单线态氧、抗衰老和抑制癌症等生物活性的类胡萝卜素。当前,国内外对红酵母红素生物活性的探究,尤其在细胞层面,成果很少。本课题研究红酵母红素在不同保存条件下的稳定性,再通过建立H2O2诱导氧化损伤PC12细胞模型,研究红酵母红素对氧化受损PC12细胞的保护作用,为未来红酵母红素的合理开发和有效应用提供理论依据。首先,利用高效液相色谱检测红酵母红素在不同的光照、氧和温度条件下的保留率。研究结果表明,红酵母红素在室内避光180 min后保留率高达92.51%;隔氧充CO2 60 d后保留率为84.68%;4℃和25℃存放150 min后保留率分别为92.61%和87.39%。然后,基于H2O2诱导氧化损伤PC12细胞模型,利用酶标法、荧光探针和实时荧光定量PCR等方法,研究红酵母红素对氧化受损PC12细胞的抗氧化保护作用。结果表明,红酵母红素能提高PC12细胞内部分抗氧化酶的活性,抑制细胞内ROS含量的升高,上调与抗氧化有关基因Nrf2、HO-1和NQO1 m RNA的表达水平,下调GSK-3β和Keap1m RNA的表达水平,其中3μmol/L红酵母红素组的检测结果在实验组中最优。在调控细胞内ROS含量方面,与模型组的DCF荧光强度相比,3μmol/L红酵母红素组的DCF荧光强度降低82.23%(P0.01),而阳性对照番茄红素组的DCF荧光强度仅下降56.16%(P0.01)。最后,采用激光共聚焦显微镜和流式细胞术等检测方法,研究红酵母红素对氧化受损PC12细胞的抗凋亡保护作用。结果表明红酵母红素能保护PC12细胞核免受损伤,降低细胞凋亡率,维持细胞质基质中Ca2+浓度的平衡,遏制线粒体膜电位的下降,同时提高抗凋亡基因Bcl-2和PARP m RNA的表达水平,抑制促凋亡基因Bax和Caspase-3m RNA的表达水平,尤其是3μmol/L红酵母红素组,各项指标最佳,其细胞凋亡率仅为1.1±0.45%(P0.01),比模型组的细胞凋亡率降低11.6%,也比阳性对照番茄红素组的细胞凋亡率小3.6%。综上,红酵母红素在避光、隔氧充CO2和低温或常温的条件下稳定性最好。更值得一提的是,红酵母红素对氧化受损PC12细胞有显著的保护作用,增强细胞抗氧化能力,激活抗氧化酶系,清除自由基,提高细胞存活率,起到抗凋亡作用,并可调节GSK-3β/Nrf2信号传导通路和介导细胞凋亡的线粒体通路相关基因m RNA的表达水平;在各实验中,3μmol/L红酵母红素的抗氧化活性和抗凋亡作用最强且效果优于相同浓度的番茄红素。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R151

【参考文献】

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本文编号：1203019