基于重链抗体的全氟辛酸免疫检测的研究

发布时间：2017-11-26 07:06

  本文关键词：基于重链抗体的全氟辛酸免疫检测的研究

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【摘要】：全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid,PFOA)是一种对人体有潜在健康危害的全氟化合物(PFCs)。PFOA具有疏水疏油的特性,20世纪大量生产使用,对生态系统和人类健康的影响已经引起人们的高度关注。现在,PFOA的检测主要依赖大型仪器,比如液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS),检测准确性高,检测限低,但是,这些方法有很大的局限性,仪器笨重,检测昂贵,通量低,不适于现场的快速高通量检测。本研究应用抗原抗体特异性结合的原理,制备一种针对PFOA的特异性抗体,用于PFOA的高通量快速检测。我们应用碳二亚胺法,将PFOA与牛血清白蛋白BSA偶联,合成完全抗原,经SDS-PAGE电泳和离子色谱仪定性检测,证明完全抗原合成成功。用三硝基苯磺酸法法测定偶联比,计算得到偶联比为9。以此完全抗原作为包被抗原,用重链抗体文库进行筛选,得到7株阳性克隆,并对重链抗体基因进行修饰,利用原核生物蛋白表达系统进行蛋白表达,得到5个抗体蛋白,以间接竞争性ELISA方法对抗体蛋白进行活性鉴定,获得1个有活性的抗体,有望用于建立快速检测不同介质中PFOA的免疫学方法。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114

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本文编号：1228935