绿原酸、葛根黄酮、松针多糖及其复合物免疫调节作用的研究

发布时间：2017-12-02 10:13

  本文关键词：绿原酸、葛根黄酮、松针多糖及其复合物免疫调节作用的研究

  更多相关文章： 绿原酸 葛根黄酮 松针多糖 腹腔巨噬细胞 免疫调节 免疫印迹

【摘要】：绿原酸(Chlorogenic acid,CGA)、松针多糖(Polysaccharides from pine needles)及葛根黄酮(Pueraria flavone,RPI)是三种分布广泛、较易获得的天然产物,具有多种生理活性。为了研究其在免疫应答中的作用,本文采用小鼠腹腔巨噬细胞为模型,研究了绿原酸、葛根黄酮、松针多糖及其复合物对静息状态及LPS激活状态下小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响及其机制。通过腹腔注射法提取小鼠腹腔巨噬细胞,MTT(噻唑蓝)比色法检测细胞代谢活力,中性红吞噬实验检测巨噬细胞的吞噬能力,Griess试剂盒法检测细胞产生NO的量,酶联免疫法(ELISA)检测巨噬细胞细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-1β、TNF-α及抑炎细胞因子IL-10的分泌水平,RT-PCR法检测细胞细胞因子及I型干扰素基因表达量,West-blot测定MAPK通路下p38MAPK、JNK和ERK以及各自的磷酸化蛋白含量的变化,探讨复合物的免疫调节作用。研究结果如下:(1)不同浓度的CGA均能显著促进静息状态下小鼠腹腔巨噬细胞产生NO,在浓度为25~100μg/mL时可提高巨噬细胞代谢活力,高剂量(50~100μg/mL)的CGA可增强巨噬细胞的吞噬能力,促进IL-1β、TNF-α的分泌并减少IL-10的产生,增强机体免疫力,且呈现剂量依赖性;当巨噬细胞处于LPS刺激状态时,在CGA浓度为25~100μg/mL可协同LPS增强其吞噬能力、促进IL-1β的释放;高剂量(50~100μg/mL)的CGA能增加促炎细胞因子TNF-α的释放,减少抗炎细胞因子IL-10的分泌量。(2)不同浓度RPI均能促进小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-10,在浓度大于12.5μg/mL时可抑制巨噬细胞产生NO及TNF-α,高浓度(50~100μg/mL)的RPI可抑制巨噬细胞的吞噬能力、促进IL-10的释放,且呈剂量依赖性;当巨噬细胞处于LPS刺激状态时,高浓度的RPI能抑制LPS对巨噬细胞中NO和IL-1β的产生,当RPI浓度小于25μg/mL时,LPS加RPI共刺激对巨噬细胞产生IL-10和TNF-α无影响。(3)不同浓度的松针多糖均能促进静息状态下小鼠腹腔巨噬细胞产生NO,当其浓度大于25μg/mL时能增强巨噬细胞的吞噬能力,促进TNF-α和IL-1β的释放。高浓度的(100~200μg/mL)松针多糖能显著抑制IL-10的产生;不同浓度的松针多糖均能协同LPS释放大量TNF-α。当松针多糖浓度大于50μg/mL时,LPS松针多糖共刺激组能显著地增强巨噬细胞吞噬能力,促进巨噬细胞释放NO、促炎因子TNF-α和IL-1β,抑制IL-10的产生,并呈剂量依赖性。(4)通过对葛根黄酮、松针多糖及绿原酸三种物质作为单因素进行正交试验,结果分析得出,当复合物中CGA浓度为100μg/mL,RPI浓度为50μg/mL,松针多糖浓度为200μg/mL时协同效果最佳,能显著增强巨噬细胞吞噬能力、产生促炎细胞因子及NO的量,且效果最佳。RT-PCR结果显示,复合物能促进静息状态及经LPS刺激状态下小鼠腹腔巨噬细胞释放促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和I型干扰素分泌表达量,抑制抑炎细胞因子IL-10基因表达,且效果显著。(5)复合物单独刺激、LPS共刺激小鼠腹腔巨噬细胞一定时间(0h,4h,8h)后,检测MAPK信号通路的p38MAPK、ERK、JNK及其磷酸化蛋白表达量,结果表明:复合物单独刺激及LPS复合物共刺激组4h和8h时,ERK、p-ERK表达量下降,p38MAPK、p-p38MAPK、JNK、p-JNK表达量上升。
【学位授予单位】：江西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R151

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郭建平,孙其荣,姚康德,周全,成国祥,郭红霞;葛根黄酮载药系统表征[J];中国药学杂志;2001年11期

2 陈迪华，斯建勇，常琪，沈连钢;从生产葛淀粉的废水液中回收葛根黄酮的研究──葛根黄酮生产新工艺[J];中国医学科学院学报;1996年01期

3 万平,宛晓春,杨晓春,陆翠珍,稽跃琴;葛根黄酮生物合成的研究[J];安徽农业大学学报;1997年02期

4 郭U，

本文编号：1244529