博落回生物碱对猪肠上皮细胞增殖作用及胃泌素表达的影响研究

发布时间：2017-12-11 05:05

本文关键词：博落回生物碱对猪肠上皮细胞增殖作用及胃泌素表达的影响研究

【摘要】：本论文通过体外细胞培养实验,探讨了博落回生物碱对肠上皮细胞IPEC-1增殖作用及胃泌素表达的影响。首先,博落回生物碱对肠上皮细胞增殖试验旨在研究博落回中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱在不同浓度、不同时间段对猪肠上皮细胞(IPEC-1)增殖的影响。IPEC-1预培养24h后,在培养基中分别加入不同浓度(4、2、1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μg/mL的血根碱或白屈菜红碱；100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg/mL的原阿片碱或别隐品碱,各组不同浓度梯度均设8个重复)的博落回生物碱处理12或24h,4-甲基偶氮唑盐(MTT)染色法检测细胞增殖。结果表明：0.25～4μg/mL的血根碱、0.25～4μg/mL的白屈菜红碱、100μg/mL的原阿片碱或别隐品碱对IPEC-1细胞的生长有显著的抑制作用(P0.05)；而0.00625～0.1μg/mL的血根碱、0.00625～0.1μg/mL的白屈菜红碱、3.125～25μg/mL的原阿片碱或1.5625～25μg/mL的别隐品碱对IPEC-1增殖具有明显的促进作用(P0.05),随着博落回生物碱浓度的不断下降,这种促进作用又缓慢减弱；此外,延长博落回生物碱处理时间至24h,发现仅0.1μg/mL的白屈菜红碱、25μg/mL的原阿片碱和25μg/mL的别隐品碱对IPEC-1增殖具有显著促进作用(P0.05),其余各组与对照组相比均无显著性差异(P0.05)。由此可见,博落回生物碱在一定浓度范围可促进IPEC-1的增殖。这说明博落回生物碱提高动物生长性能可能是通过促进小肠细胞增殖分化更新,从而增强小肠消化、吸收、免疫屏障和应激反应等功能的途径实现的。其次,博落回对胃泌素及其受体表达影响的试验旨在研究博落回中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱对正常IPEC-1、人肝癌HepG2的增殖影响,并探讨胃泌素及其受体表达与细胞增殖和凋亡之间的关系。IPEC-1和HepG2细胞用不同浓度梯度的胃泌素(10-5～0-10mol/L)处理12h后,采用MTT染色法检测细胞增殖情况。结果表明,10-7～10-10mol/L胃泌素对两种细胞增殖都具有显著的促进作用(P0.05),而经高浓度10-5～10-6nol/L胃泌素处理的两种细胞与对照组相比均无显著性差异(P0.05)。通过回收细胞及上清液,用ELISA法检测经血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱处理的IPEC-1和HepG2细胞中胃泌素及其受体的表达水平。结果显示：以上博落回生物碱经处理后的IPEC-1细胞中胃泌素及其受体的表达有显著的上升(P0.05),而对HepG2细胞中胃泌素无显著性(P0.05),但对其受体的表达表现出显著的抑制作用(P0.05)。然后,进一步用Western Blotting法检测了各博落回生物碱(血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱)处理HepG2细胞后,其胃泌素及其受体表达水平的影响。结果显示：随着血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱或别隐品碱的浓度上升,HepG2细胞中胃泌素及其受体的表达呈显著的抑制增强趋势(P0.05),这与ELISA法结果一致。说明博落回生物碱可能具有通过对胃泌素的调节作用促进胃肠道正常上皮细胞增殖并能抑制肿瘤细胞生长的效果。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R151

【参考文献】

中国期刊全文数据库前10条

1 张国洲;尤民生;;博落回根杀虫有效成分分析及其活性测定[J];安徽农业大学学报;2009年01期

2 庞建新,马仁强,刘兰梅,蒋毅萍,孙莉莎;博落回总碱对肝癌细胞的毒性作用和体内抗肿瘤作用[J];第一军医大学学报;2005年03期

3 杨川华,萧树东;胃泌素和结肠肿瘤[J];国外医学(消化系疾病分册);2001年01期

4 蔡鹏;孙志良;曾建国;饶华;李孝文;万其见;孙文;;不同剂量博落回提取物对断奶仔猪生长性能的影响[J];中国畜牧兽医;2010年05期

5 郁建平;赵东亮;孟祥斌;周晓秋;;博落回生物碱对八种真菌的抑菌作用研究[J];贵州大学学报(自然科学版);2006年01期

6 满意;张春勇;李美荃;骆雪;陈克嶙;郭荣富;;博落回提取物对早期断奶仔猪生长性能和血清免疫参数的影响[J];动物营养学报;2013年01期

7 郁建生;;博落回制剂对禽霍乱、仔猪白痢的对比治疗试验[J];黑龙江畜牧兽医;2007年02期

8 邓敦;邓跃林;;博落回生物碱的研究进展[J];家畜生态学报;2009年04期

9 杜娟,王秀琴;胃泌素的生物活性及其信号传导通路[J];解剖科学进展;2003年04期

10 郁建生;郁建平;;大孔吸附树脂分离纯化博落回总生物碱的研究[J];江苏农业科学;2007年03期