硫酸铍致人胚肺成纤维细胞凋亡机制的研究
本文关键词：硫酸铍致人胚肺成纤维细胞凋亡机制的研究 出处：《宁夏医科大学》2014年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的：通过观察不同浓度硫酸铍（BeSO4）对人胚肺成纤维细胞（MRC-5）凋亡率、凋亡相关基因表达水平、胞内三磷酸肌醇受体（IP3R）及其配体肌醇三磷酸（IP3）含量以及胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变，探讨BeSO2+4是否通过IP3R Ca通道影响细胞凋亡，同时观察IP3R拮抗剂和激活剂干预后人胚肺细胞凋亡率变化。 方法：体外培养MRC-5细胞，分为空白对照组、低中高BeSO4染毒组、BeSO4+2-APB组及BeSO4+IP3组等6组。BeSO4低、中、高剂量组浓度分别为1、10、100μmol/L，2-APB组和IP3组剂量为10μmol/L+10μmol/L BeSO4。细胞生长至对数生长期，达到细胞密度后，根据实验需求，加入药物分别培养24h和48h后收集细胞。进行以下实验：1.流式细胞术检测细胞凋亡率；2.实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测IP3RⅢ、bcl-2、bax、Caspase-3mRNA的表达；3.ELISA法测定细胞内IP3RⅢ及IP3含量变化；4.激光共聚焦法检测胞内[Ca2+]i。 结果： 1.24h和48h BeSO4低、中、高剂量组与同时相空白对照组相比，MRC-5细胞凋亡率有不同程度下降（P㩳0.01）；BeSO4低、中、高剂量组染毒24h和48h后与同时相空白对照组相比，MRC-5细胞Bcl-2mRNA表达升高，Bax和Caspase-3mRNA表达降低，Bcl-2/Bax比值升高（P㩳0.05，P㩳0.01）； 2.24h和48h BeSO4低、中、高剂量组与同时相空白对照组相比，MRC-5细胞IP3RⅢ mRNA表达均升高（P0.05，P㩳0.01）；但ELISA结果未发现相应组别IP3RⅢ蛋白含量增多（P0.05）；其配体IP3在BeSO4染毒MRC-5细胞后较同时相空白对照组有不同程度升高，但差异无显著性（P0.05）； 3.24h BeSO4高剂量组与同时相空白对照组相比，Ca2+含量升高（P0.05）；48h BeSO4中、高剂量组与同时相空白对照组相比，Ca2+含量降低（P0.05）； 4.拮抗剂和激活剂干预影响：24h和48h BeSO4+2-APB组与同时相BeSO4中剂量组相比，MRC-5细胞凋亡率下降（P㩳0.05），且低于同时相空白对照组（P㩳0.01）；24h和48hBeSO4+IP3组与同时相BeSO4中剂量组相比，MRC-5细胞凋亡率升高（P㩳0.05），但仍低于同时相空白对照组（P㩳0.01）；24h和48h BeSO4+IP3组与相应时相BeSO4中剂量组相比，MRC-5细胞IP3含量均升高，差异有统计学意义（P㩳0.01）；24h和48h BeSO4+2-APB组与同时相BeSO4中剂量组相比，，Ca2+含量降低（P0.01），且低于同时相空白对照组组（P0.05，P0.01）；24h和48h BeSO4+IP3组与同时相BeSO4中剂量组，Ca2+含量升高（P0.05，P0.01）。 结论：BeSO4可导致MRC-5细胞发生凋亡异常,其机制可能与其对MRC-5细胞的Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达量异常及胞内Ca2+浓度的异常改变有关；BeSO4染毒后胞内Ca2+浓度通过内质网IP23R Ca+通路调节，IP3模拟物对其凋亡抑制有一定的改善作用。
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【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【参考文献】
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