叶酸对妊娠大鼠胎盘PCNA、P16、CyclinD1表达及胎盘功能的影响

发布时间：2018-02-01 17:14

本文关键词： 叶酸大鼠胎盘 PCNA P16 CyclinD1 游离雌三醇　出处：《承德医学院》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：叶酸临床应用于预防神经管畸形等人类出生缺陷的效果已得到肯定。本实验通过给予妊娠大鼠灌服大、中、小剂量叶酸，采用HE染色方法观察叶酸对胎盘形态结构的影响；免疫细胞化学方法分析叶酸对妊娠大鼠胎盘PCNA、P16、CyclinD1表达的作用；应用固相酶联免疫法（ELISA），检测血清游离雌三醇（FE_3）水平的变化，旨在探讨叶酸对胎盘生长发育及功能的影响，为临床安全、合理应用叶酸预防出生缺陷性疾病提供理论和实验依据。方法： 1实验动物的分组及干预：8～10周龄健康清洁级SD大鼠60只。雌性40只，雄性20只。雌性大鼠随机分为四组：对照组、大、中、小剂量叶酸干预组，每组10只。大鼠按1:2雄、雌比例合笼，次晨查阴栓阳性者确定为受孕，记为E0.5d。叶酸干预组自确定受孕之日起，分别灌服0.5mg/kg/d（小剂量组）、1.0mg/kg/d（中剂量组）、2.0mg/kg/d（大剂量组）的叶酸，连续10天。对照组灌服等容量生理盐水。 2取材及制片：各组孕鼠均于妊娠13.5天（E13.5d）水合氯醛麻醉取材，每只孕鼠随机取一个胎盘置于Bouin液固定，常规脱水、包埋，连续切片，每隔10张取两张裱片，待染。经心腔所取血液置于离心管离心获取血清。 3一般组织学技术：切片HE染色，光学显微镜下观察叶酸干预组与对照组胎盘组织结构及细胞形态的发育状态及变化。 4免疫组织化学技术：采用免疫组化超敏二步法显示叶酸干预组和对照组胎盘中PCNA、P16、CyclinD1阳性细胞，应用Mivnt显微图像分析仪分析阳性面积占分析面积的比率，说明PCNA、P16及CyclinD1表达的情况。 5固相酶联免疫技术（ELISA）：检测叶酸干预组与对照组妊娠大鼠血清FE_3水平及变化，说明胎盘的功能状态。 6统计学处理采用单因素方差分析和q检验。结果： 1一般组织学结果显微镜下观察发现，对照组的胎盘组织学分带出现，从胎鼠面向母体面依次为迷路带、海绵带和蜕膜带。迷路带绒毛明显，绒毛外包绕2-3层滋养层细胞，中部可见吻合的绒毛血管。海绵带细胞滋养层细胞排列成条索状并交织成网，网眼内充以糖原细胞群或母体血管。可见体积较大的滋养层巨细胞。蜕膜带若干胶原纤维和成纤维样细胞交错排列，结构紧凑，嘂膜细胞结构清晰，未见空泡现象。叶酸干预各组大鼠胎盘组织及细胞形态结构与对照组比较无明显变化。 2免疫组化结果 2.1PCNA的表达 PCNA在各组胎盘细胞均可见表达。阳性物质呈棕色或黄色颗粒状，局限分布于细胞核内。单因素方差分析显示，叶酸干预组胎盘细胞PCNA的阳性率明显高于对照组（P＜0.01），提示叶酸提高了PCNA的表达，具有促进胎盘细胞增殖的作用。不同剂量叶酸组间比较q检验表明，大、中剂量叶酸组PCNA的表达均明显高于小剂量叶酸组，差异显著（P＜0.05）；中剂量叶酸组PCNA的表达高于大剂量叶酸组，但无明显差异（P＞0.05），说明叶酸剂量的不同影响了PCNA的表达阳性率，不同剂量叶酸使PCNA表达量不同，对妊娠大鼠胎盘细胞的增殖促进作用有差异，在一定范围内其增殖程度与剂量有关。 2.2P16表达 P16在各组胎盘细胞均可见表达。阳性物质呈棕色或黄色颗粒状，大部分位于细胞核内，少数可见胞浆和胞核同时有少量表达。单因素方差分析显示，叶酸干预组胎盘细胞P16的阳性率明显低于对照组（P＜0.01）,提示叶酸能降低P16的表达，减弱其抑制细胞增殖的作用。不同剂量叶酸组间比较q检验表明，大、中剂量叶酸组P16表达均低于小剂量叶酸组，差异显著（P＜0.05）；大剂量叶酸组P16表达低于中剂量叶酸组，但无明显差异（P＞0.05）。不同剂量叶酸组P16表达量的差别，提示剂量可影响叶酸调节胎盘细胞增殖的作用，在一定范围内其调节增殖程度与剂量有关。 2.3CyclinD1表达 CyclinD1在各组胎盘细胞均可见表达。阳性物质呈棕色或黄色颗粒状，大部分位于细胞核内，少数同时见于胞浆和胞核。单因素方差分析显示，叶酸干预组胎盘细胞中CyclinD1的表达明显高于对照组（P＜0.01）,说明叶酸提高了CyclinD1的阳性表达，提示叶酸具有促进胎盘细胞增殖的作用。不同剂量叶酸组间比较q检验表明，大、中剂量叶酸组CyclinD1表达均高于小剂量叶酸组，差异显著（P＜0.05）;大剂量叶酸组CyclinD1的表达高于中剂量叶酸组，，但无明显差别（P＞0.05）。说明叶酸剂量的不同影响了CyclinD1表达阳性率，反映剂量使叶酸对妊娠大鼠胎盘细胞促进增殖作用不同，在一定范围内其增殖效应与剂量有关。 3FE_3水平检测结果 FE_3水平按对照组、小剂量叶酸组、中剂量叶酸组、大剂量叶酸干预组顺序呈逐渐升高趋势。单因素方差分析显示，叶酸干预组孕鼠体内FE_3水平明显高于对照组（P＜0.05），说明叶酸提高了FE_3水平，具有促进胎盘合成功能的作用。不同剂量叶酸组之间比较q检验表明，大、中剂量叶酸组FE_3水平均明显高于小剂量叶酸组（P＜0.05）；大剂量叶酸组与中剂量叶酸组之间比较FE_3水平无明显差别（P＞0.05）。说明叶酸剂量的不同影响孕鼠体内FE_3水平，提示剂量可能影响叶酸促进胎盘细胞合成功能的能力，不同剂量的叶酸对胎盘合成功能的影响不同，在一定范围内其促进合成效应与剂量有关。结论： 1给予受孕大鼠大、中、小剂量叶酸时，胎盘的正常组织结构与细胞形态的生长发育无明显改变。 2大、中、小剂量叶酸干预能提高胎盘细胞PCNA的表达，叶酸具有促进胎盘细胞增殖的作用。不同剂量的叶酸对胎盘细胞增殖影响程度不同，一定范围内其促增殖效应与剂量有关。 3妊娠大鼠服用大、中、小剂量叶酸可降低胎盘细胞内P16的表达，使其抑制细胞增殖作用减弱。不同剂量叶酸影响P16抑制妊娠大鼠胎盘细胞增殖作用程度不同，在一定范围内与剂量有明显关联。 4叶酸干预能明显提高孕鼠血清FE_3水平，叶酸具有促进胎盘细胞合成功能的作用。不同剂量的叶酸对胎盘合成功能的影响不同，在一定范围内合成效应与剂量有关。 5综上所述，叶酸可能通过影响细胞增殖正负向调节因素CyclinD1和P16的表达，促进妊娠大鼠胎盘细胞的增殖活性。叶酸还通过提高胎盘的合成功能，促进胎盘的发育。一定剂量叶酸对胎盘的组织结构发育及功能发挥起到有益作用。
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【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R151

【参考文献】