原代神经和星形胶质细胞混合培养模型在邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的神经毒性评价中的应用

发布时间：2018-03-01 12:42

本文关键词： 邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯神经毒理免疫组化氧化应激神经元计数神经突起长度星形胶质细胞　出处：《华中师范大学》2013年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：当今社会塑料作为一种重要的工业原料被广泛的应用,同时其原料聚氯乙烯(PVC)中含有的工业塑化剂:邻苯二甲酸酯类物质也被大量的生产。其中用量最大而且用途最广泛的就是邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)。由于在生产过程中,DEHP本属于一种化学添加剂,由于其自身的化学性质决定,会慢慢的从工业品中不断缓释,最终到达环境中。降解过程往往也需要很长时间,所以可以说DEHP无处不在。目前报道最多也是目前大家公认的是DEHP对于生物具有生殖和发育毒性,这是由于其具有雌激素、以及抗雄激素的活性特质,同时DEHP内分泌干扰物的特性会调控体内甾体合成的多种酶的活性。中枢神经系统CNS(Central nervous system)在其发育完善的过程中对于体内荷尔蒙的变化是非常敏感的,此期间如果暴露于DEHP这类具有内分泌干扰特性的外源性化学物质,其微观的形态结构和神经系统功能可能会受到影响。相关报道和流行病学研究指出:DEHP在一定浓度范围内具有神经毒性,并可能为一种潜在致癌物。但是对于相关的研究的数据非常有限,而且相应的毒理学机理和机体摄取途径也不是很明确。所以最近关于DEHP的神经毒性机理以及会导致人类神经系统功能和发育影响的研究受到了广大科学家的重视。对于DEHP神经毒性和对人体的潜在暴露危害的研究显得迫在眉睫。本文重点研究在于日常暴露DEHP以后测定动物大脑内残留该化学品的准确含量,然后以此为基础剂量评价其对于动物中枢神经系统的毒性机制作用,同时也对于其日常暴露安全剂量作进一步的探讨。在体内实验中,日常口服暴露于DEHP的小鼠,获取脑匀浆并运用气相色谱与质谱联用法测定出其中积累的DEHP含量。在最高染毒剂量组10mg/kg/day中小鼠脑匀浆中测得DEHP含量为22.3μmol/L。这些证据不仅说明DEHP可以穿越血脑屏障,而且在脑部组织有积累效应。同样在脑部的形态学切片研究中,HE染色(hematoxylinandeosin)和尼氏染色中同样观察到暴露DEHP后所引起的脑部神经损伤的状态。在体外实验中,胶质细胞和神经元细胞混合原代培养体系将应用在DEHP的神经毒性评价当中。在体外实验中,氧化损伤机制将作为评价体系中主要的机制去研究,应用在细胞培养体系中总氧自由基生成量去评价和判断细胞培养体系中受到氧化损伤的程度。同时,维生素C作为抗氧化剂以减少DEHP对于细胞的氧化损伤作用,也作为一种阻断剂以证明氧化损伤机制的发生。其次,应用ImageJ软件中的NeuriteTracer插件来进一步定量的分析机体受损伤的程度,它首先通过分析相关细胞损伤的免疫组化的图片,然后通过对神经元数量的计算,神经突起长度的累加,以及胶质细胞灰度值变化的分析,定量的给出DEHP造成的神经毒性程度。从以上实验结果中发现,即使在1 nmol/L DEHP最少剂量暴露组中总氧自由基的含量就比空白对照组有显著的增加,这就说明整个混合细胞的培养体系在DEHP的暴露中很容易受到氧化应激的影响。同时另一方面,由于混合培养体系中胶质细胞的清除自由基的作用,也就是胶质细胞的增生现象发生在中等剂量的染毒剂量组100nmol/L,1μmol/L中,神经系统的保护机制也同时启动。可以帮助神经元抵御外源性化学物质的毒性影响。但是在最高剂量组1Oμmol/L中,所有以上的表征神经损伤的指标都不同程度的下降也包括胶质细胞的增生作用,说明在高剂量的DEHP暴露中其毒性作用破坏了神经系统的保护机制,从而导致整个神经元胶质细胞混合培养体系受到了损伤。最后在整个的实验基础上,我们还需要更多的数据以支持和外推暴露DEHP在动物神经系统中的影响包括摄入途径和毒性机制研究。同样,在环境暴露DEHP的情况下,人体的神经系统的安全性评价也需要进一步完善。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中师范大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R114

【相似文献】