SB-431542对铀矿尘所致肺成纤维细胞合成胶原蛋白的影响

发布时间：2018-03-03 15:46

  本文选题：铀矿尘　切入点：SB-431542　出处：《南华大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：采用TGF-β1抑制剂SB-431542作用于成纤维细胞，观察SB-431542对成纤维细胞的转化能力、合成羟脯氨酸、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的影响。探讨SB-431542对成纤维细胞合成胶原纤维的抑制作用，为寻找防治矽肺纤维化作用靶点提供基础资料。 方法：用120μg/ml的铀矿尘混悬液作用于RAW264.7巨噬细胞24h后，分离制备上清液为铀矿尘组条件培养液；将无铀矿尘作用RAW264.7巨噬细胞培养24h后，分离制备上清液为对照组用条件培养液。将铀矿尘组和对照组条件培养液作用于正常小鼠肺成纤维细胞（L929细胞）6、12、18、24、30、36h后。分别测定细胞内α-SMA的表达、细胞外羟脯氨酸、I型胶原(COL I)及III型胶原(COL III)蛋白的含量。通过不同浓度（0、0.5、1、5、10μmol/L）的SB-431542作用于L929细胞2h后，再用铀矿尘组和对照组条件培养液作用于L929细胞30h，采用细胞免疫化学法和western blot测定细胞内α-SMA的表达，，消化法测细胞外羟脯氨酸含量，ELISA法和western blot检测细胞外COL I和COL III蛋白的含量。 结果： 1.铀矿尘对巨噬细胞分泌TGF-β1的影响 120μg/ml铀矿尘作用于RAW264.7巨噬细胞8h后，测定细胞培养上清液中TGF-β1含量结果显示，在染尘初期可见细胞培养上清液中TGF-β1含量有所增高，而在染尘16、24、32h后细胞培养上清液中TGF-β1含量则明显高于对照组中TGF-β1含量，与对照组比较具有统计学意义(P＜0.01），且在24h时达到峰值144.556±7.125。 2.铀矿尘条件培养上清液对成纤维细胞胶原蛋白合成的作用 将120μg/ml铀矿尘刺激巨噬细胞24h后收集的铀矿尘条件培养液作用于L929细胞，经6、12、18、24、30、36h作用后，随着作用时间的增加，细胞内α-SMA的表达明显增多，在作用24-36h后细胞内α-SMA的表达更为显著。细胞外的羟脯氨酸的含量在作用18-36h后与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01），作用36h后其羟脯氨酸的含量达到0.226±0.002mg/L。铀矿尘条件培养上清液作用于L929细胞12至36h后，COL I蛋白的含量逐渐增加，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。而COL III蛋白的含量的增加主要在作用于18至36h后,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01），同时可见COL I蛋白含量整体水平均高于COL III蛋白含量。 3.SB-431542对成纤维细胞胶原蛋白合成的作用 应用不同浓度（0、0.5、1、5、10μmol/L）SB-431542作用于L929细胞2h后，再用铀矿尘条件培养液作用L929细胞30h。SB-431542浓度为5、10μmol/L时能显著降低细胞内α-SMA的表达、显著降低细胞外羟脯氨酸和COL I和COLIII蛋白含量，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。 结论： 1.120μg/mL铀矿尘作用于RAW264.7巨噬细胞后，能使细胞培养上清液中TGF-β1含量增加，在作用24h后TGF-β1含量达到峰值。 2.120μg/mL铀矿尘作用于RAW264.7巨噬细胞24h后收集的铀矿尘条件培养液能使成纤维细胞α-SMA表达增强，成纤维细胞合成羟脯氨酸、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白含量增多。 3.5μmol/L SB-431542可显著减少铀矿尘条件培养液对成纤维细胞内α-SMA的表达，抑制羟脯氨酸、 COL I和COL III蛋白的合成。
[Abstract]:Objective: using TGF- beta 1 inhibitor SB-431542 on fibroblast cells, the effects of SB-431542 on fibroblasts transformed into ability, the synthesis of hydroxyproline, effects of type I and type III collagen. To investigate the inhibitory effect of SB-431542 on fibroblast collagen synthesis, and provide basic information for prevention and treatment effects of silicosis fibrosis target.
Methods: 120 g/ml uranium dust suspension in RAW264.7 macrophage 24h after separation and preparation of supernatant liquid for uranium dust group; no uranium dust RAW264.7 macrophages after 24h culture supernatant for separation and preparation of control group with conditioned medium. The uranium dust group and the control group of conditioned medium in normal mouse lung fibroblasts (L929 cells) after 6,12,18,24,30,36h. The intracellular expression of -SMA alpha were measured, extracellular hydroxyproline, collagen type I (COL I) and collagen III (COL III). The protein content by different concentration (0,0.5,1,5,10 mol/L) SB-431542 in L929 cells after 2H. Then the conditions of uranium dust group and the control group L929 cells were cultured in 30h, the expression of alpha -SMA cells were determined by immunocytochemistry and Western blot, measuring extracellular digestion of hydroxyproline, ELISA and Western blot The content of COL I and COL III protein was detected.
Result锛

本文编号：1561667