镉对小鼠睾丸间质细胞毒性作用的分子机制研究

发布时间：2018-03-22 21:18

  本文选题：镉　切入点：睾丸间质细胞　出处：《安徽医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的以体外培养小鼠睾丸间质细胞系TM3细胞为模型,研究镉对TM3细胞的毒性作用,进而探讨镉对TM3细胞毒作用的分子机制。方法(1)给予不同浓度的CdCl_2(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)处理TM3细胞,分别孵育不同时间(4h,8h,12h,16h,24h),采用CCK-8法检测各组细胞活力。(2)给予20μM CdCl_2处理TM3细胞不同的时间(4h,8h)后收集细胞及上清液,采用ELISA法测定细胞上清液中睾酮的水平,采用western blot和RT-PCR法检测睾酮合成通路关键酶蛋白和m RNA的表达水平。(3)给予20μM CdCl_2处理TM3细胞不同的时间(4h,8h)后收集细胞,采用western blot和RT-PCR法检测氧化应激相关蛋白和m RNA的表达水平。(4)给予20μM CdCl_2处理TM3细胞不同的时间(4h,8h)后收集细胞,采用western blot和RT-PCR法检测内质网应激相关蛋白和m RNA的表达水平。结果(1)不同浓度的镉(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)处理4h后,5μM、10μM和20μM组细胞的存活率与同一时间点对照组比较没有差异,40μM组细胞的存活率明显低于同一时间点对照组(p0.01);不同浓度的镉(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)处理8h后,5μM组细胞的存活率与同一时间点对照组比较略有降低,10μM、20μM和40μM组细胞的存活率与同一时间点对照组明显降低(p0.01);不同浓度的镉(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)处理12h、16h、24h后,各处理组细胞的存活率均低于同一时间,并具有明显的剂量效应关系(p0.01)。(2)给予20μM CdCl_2处理TM3细胞不同的时间(4h,8h),镉处理组细胞上清睾酮含量明显低于对照组睾酮含量(p0.01);镉处理组TM3细胞的St AR、P450scc和17β-HSD m RNA的表达水平与对照组比降低(p0.05,p0.01),且显著下调镉处理组TM3细胞St AR、P450scc、3β-HSD、P45017α和17β-HSD的蛋白的表达水平(p0.05,p0.01)。(3)给予20μM CdCl_2处理TM3细胞不同的时间(4h,8h),显著诱导镉处理组TM3细胞HO-1蛋白和m RNA的表达水平,并具有明显的时间效应关系(p0.01);然而镉处理对TM3细胞HO-2的蛋白表达没有明显的影响;镉处理8h组SOD1、SOD2、SOD3、GSH-Px及CAT的m RNA表达水平与对照组的差异均具有统计学意义(p0.05,p0.01)。(4)给予20μM CdCl_2处理TM3细胞不同的时间(4h,8h),显著性上调镉处理组内质网分子伴侣GRP78蛋白和m RNA的表达,具有明显的时间效应关系(p0.01);此外,镉显著诱导GRP94 m RNA表达,也具有明显的时间效应关系(p0.05,p0.01),提示ATF6信号通路被激活。镉处理显著诱导TM3细胞PERK蛋白的磷酸化水平(p0.01);镉处理明显增加TM3细胞e IF2α蛋白的磷酸化水平,具有时间效应关系(p0.05,p0.01);此外,CHOP的蛋白表达水平在镉处理组也明显增加,并且随镉处理的时间延长,诱导作用更加明显(p0.01),提示PERK信号通路被激活。镉处理诱导TM3细胞IRE1α蛋白的磷酸化水平,具有明显的时间效应关系(p0.05,p0.01);此外,镉处理组JNK蛋白的磷酸化水平明显高于对照组,也具有明显的时间效应关系(p0.01),提示IRE1信号通路被激活。结论(1)镉处理能够抑制TM3细胞的睾酮合成和分泌,镉对TM3细胞睾酮合成的抑制作用可能与镉下调睾酮合成酶m RNA和蛋白的表达有关。(2)镉处理诱导TM3细胞发生氧化应激和内质网应激,氧化应激和内质网应激可能在镉诱导的TM3细胞损伤中起重要作用。
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本文编号：1650442