水中常见肠病毒高通量快速定量检测方法的研究

发布时间：2018-04-05 22:38

本文选题：肠病毒　切入点：膜吸附-洗脱法　出处：《扬州大学》2012年硕士论文

【摘要】：研究目的针对肠道病毒(entero virus)、轮状病毒(Rotavirus, RV)、肠道腺病毒(enteric adenovirus, EAdV)等水中常见肠病毒,建立相关荧光定量RT-PCR方法并进行多种水体的实际检测应用。本课题的研究将为今后进一步了解各种水体中肠病毒的分布奠定基础。研究意义水是人们生命活动的要素,人们要从各方面与水接触如饮用水、洗涤用水、灌溉用水、工业用水等。随着人口的增长,工农业的发展,人们的需用水量在迅猛增加。然而,由于水资源保护工作不力,环境水体的各种污染问题也日益严重,其中,水体的病毒污染也不容忽视。水体的病毒污染可能导致水源性疾病的爆发,其中介水传播性病毒主要为肠病毒,它来源于水体的粪便污染,通过粪-口途径传播,可引起感染性腹泻、甲肝、戊肝等法定传染病。目前,细菌总数、大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌是饮用水细菌学卫生指标,但随着近几年有关在细菌学指标合格的饮用水中检出肠道病毒以及饮用水源受污染而导致病毒性肠道疾病暴发流行的报道不断增多,表明细菌学指标并不能完全指示肠道病毒的去除,细菌学指标安全并不能代表饮用水的安全性。细菌具有细胞结构而病毒无细胞结构,病毒的非细胞属性使它对环境压力的耐受比细菌强。同时,在对消毒剂如氯的抗性上病毒强于细菌,因此,在常规水处理过程中,细菌的杀灭不能指示病毒的杀灭。当病毒一旦穿透水处理过程并存活于饮用水中,则表明病毒性水媒传播的可能性存在。美国、法国在饮用水卫生标准中均规定肠道病毒的检出为零,而在我国,尚未将病毒检出列入相关标准。因此,开展水中肠病毒的检出工作对于今后我国饮用水卫生标准的提高是具有深刻的现实指导意义。研究方法利用TaqMan探针技术建立肠道病毒通用型(enterovirus, EV-U)、脊髓灰质炎病毒Ⅰ型(poliovirus, PV I)、轮状病毒(Rotavirus, RV)、肠道腺病毒(enteric adenovirus, EAdV)的荧光定量RT-PCR检测方法,并通过制备各种病毒的标准品,对病毒进行准确定量；同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。通过PV Ⅰ加标实验和实时荧光定量RT-PCR技术检测水中的PV Ⅰ病毒,比较用膜吸附-洗脱法和载阳电荷滤料法富集水中病毒的回收率和效果。利用建立起的EV-U、PVI、RV、EAdV荧光定量RT-PCR方法和病毒富集方法,检测北京卢沟桥污水处理厂二沉池出水、出厂水出水,天津海河水和卫津河水中的病毒含量。研究结果本研究建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量RT-PCR方法,能检测肠道病毒、脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、轮状病毒、肠道腺病毒。该方法特异性为100%,灵敏度分别达到102copies/μl,重复性好。三种病毒富集方法对具有不同载量病毒的加标水样分别进行富集并计算回收率,载阳电荷滤料法不仅回收率最高,而且效果稳定,回收率在91%-94%；而膜吸附-洗脱法的回收率次之,回收率仅为70%-80%。利用建立起的EV-U检测方法检测3月份北京卢沟桥污水处理厂二沉池出水、出厂水出水,天津海河水和卫津河水,均为阴性；利用建立起的PV Ⅰ检测方法检测3月份北京卢沟桥污水处理厂二沉池出水、出厂水出水,天津海河水和卫津河水,均为阴性；利用建立起的RV检测方法检测3月份北京卢沟桥污水处理厂二沉池出水、出厂水出水,天津海河水和卫津河水,均为阴性；利用建立起的EAdV检测方法检测3月份北京卢沟桥污水处理厂二沉池出水和出厂水出水为阳性,天津海河水和卫津河水为阴性。
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【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R123.1;X832

【参考文献】