硫酸铍致人胚肺成纤维细胞凋亡线粒体途径的作用机制

发布时间：2018-06-03 15:43

本文选题：硫酸铍 + 线粒体通透性转换孔　；参考：《宁夏医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的本研究观察不同浓度硫酸铍(BeSO4)对体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5)早期凋亡率、线粒体膜电位的影响,凋亡诱导因子(AIF)、凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)mRNA以及蛋白表达的改变,研究线粒体通透性转换孔(mPTP)在BeSO4致体外培养MRC-5细胞凋亡中的作用,并观察mPTP开放抑制剂环孢霉素A(CsA)与促开放剂苍术苷(ATR)对此作用的干预。方法体外培养MRC-5细胞系,采用CCK-8法确定CsA和ATR干预剂量;试验分空白对照组、Be SO4染毒组(剂量分别为1、10、100μmol/L)、干预组(10μmol/L BeSO4+10μmol/L CsA和10μmol/L BeSO4+10μmol/L ATR)、干预对照组(10μmol/L CsA和10μmol/L ATR);分别染毒及干预24h、48h、72h后,收集细胞进行试验,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,JC-1荧光探针标记检测线粒体膜电位的改变,实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测AIF、Apaf-1 mRNA表达,蛋白免疫印记法(Western Blot)检测各剂量组AIF、Apaf-1蛋白表达水平。结果1.染毒24h、48h、72h,CCK-8法确定CsA和ATR干预剂量均为10μmol/L。2.BeSO4低、中、高剂量组分别染毒24h、48h、72h,MRC-5细胞早期凋亡率出现不同程度降低,染毒72h,BeSO4低、中、高剂量染毒组与同时相空白对照组相比降低(P0.05),CsA干预组与同时相空白对照组相比降低(P0.05),ATR干预组与同时相空白对照组相比差异具有统计学意义(P0.05),与BeSO4中剂量组相比增高但无统计学意义(P0.05)。3.BeSO4低、中、高剂量分别染毒48h、72h,线粒体膜电位出现不同程度的增高,染毒48h,BeSO4高剂量组与同时相空白对照组及Be SO4中剂量组相比增高(P0.05),染毒72h,BeSO4中剂量组与同时相空白对照组相比增高(P0.05);在72h时间点,CsA、ATR干预后与同时相Be SO4中剂量组相比线粒体膜电位降低(P0.05),CsA、ATR对照组与同时相Be SO4中剂量组相比差异有统计学意义(P0.05)。4.BeSO4低、中、高剂量分别染毒24h、48h、72h,三个剂量组AIF m RNA表达与同时相空白对照组相比降低(P0.05);在24h、48h、72h时间点,CsA干预组与同时相空白对照组相比降低(P0.05),但与同时相BeSO4中剂量组相比差异无统计学意义(P0.05);在24h、72h时间点,ATR干预组与同时相BeSO4中剂量组相比增高(P0.05)。5.BeSO4低、中、高剂量分别染毒24h、48h、72h,三个剂量组Apaf-1 m RNA表达与同时相空白对照组相比降低(P0.05);在24h、72h时间点,CsA干预组与同时相空白对照组相比降低(P0.05),CsA干预组与同时相BeSO4中剂量组相比降低(P0.05);在24h、48h、72h时间点,ATR干预组与同时相空白对照组相比差异均具有统计学意义(P0.05),在24h、48h时间点,与同时相BeSO4中剂量组相比增高(P0.05)。6.染毒48h、72h,Be SO4中、高剂量组与同时相空白对照组相比AIF蛋白表达降低(P0.05);在72h时间点,CsA干预组与同时相空白对照组相比降低(P0.05),与同时相BeSO4中剂量组相比降低(P0.05),ATR干预组与同时相BeSO4中剂量组相比增高,差异具有统计学意义(P0.05)。7.染毒24h、48h,BeSO4中、高剂量组与同时相空白对照组相比Apaf-1蛋白表达降低(P0.05);在24h时间点,CsA干预组与同时相空白对照组相比降低(P0.05),ATR干预组与同时相Be SO4中剂量组相比增高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论Be SO4可抑制MRC-5细胞凋亡;mPTP在BeSO4致MRC-5细胞早期凋亡中发挥了一定的作用;经CsA与ATR干预验证了线粒体通透性转换孔的作用。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of different concentrations of beryllium sulfate ( BeSO4 ) on the early apoptotic rate , mitochondrial membrane potential , apoptosis - inducing factor ( Apaf - 1 ) mRNA and protein expression in human embryonic lung fibroblasts ( MRC - 5 ) . At 24 h , 48 h and 72 h , the expression of Apaf - 1 mRNA was significantly lower than that in the control group ( P0.05 ) . At 24 h , 48 h , 72 h , the dose of CsA was lower than that in the control group at the same time ( P0.05 ) . Compared with the control group , the expression of Apaf - 1 protein decreased ( P0.05 ) . Compared with the control group , the expression of Apaf - 1 protein decreased ( P0.05 ) at the time of 24h , 48h and BeSO4 . Conclusion Be SO 4 can inhibit the apoptosis of MRC - 5 cells .
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R135

【参考文献】