p53非依赖性信号通路在MMS致细胞凋亡中的机制研究

发布时间：2018-08-23 15:51

【摘要】：MMS,又名甲磺酸甲酯,是一种典型的甲基化试剂。MMS作为重要的治疗癌症的化疗药物,能够导致细胞发生DNA双链断裂(DSB)。DNA双链断裂的形成是许多抗癌药物发挥药效的重要标志。目前众多研究证明,MMS能够诱导不同细胞株中p53依赖性信号通路介导的细胞凋亡的发生。然而,当p53基因敲除时,细胞仍然表现出对MMS药物相似的敏感性,从而证明在诱导细胞凋亡过程中p53非依赖性信号通路的存在。 为了进一步研究MMS诱导的细胞凋亡中p53非依赖性信号通路的具体机制,本实验建立了MMS诱导细胞凋亡的实验模型。实验选取了2种细胞株,分别为p53基因缺失的H1299细胞和Hep3B细胞。并确定了MMS染毒的5种浓度,分别为50μM、100μM、200μM、400μM和800gM。实验结果证明,在MMS染毒时间为12h,染毒浓度为50μM、100μM、200μM、400μM和800μM时,两种细胞株中均出现γH2AX焦点,即细胞发生不同程度的DNA损伤。在MMS染毒时间为12h,染毒浓度为400μM和800gM时,两种细胞株均发生细胞凋亡。这一细胞凋亡的过程涉及到线粒体膜通透性的降低,Caspase2蛋白从细胞核到细胞质的转移,细胞色素C的释放,以及Caspase9的剪切激活等。然而,MMS诱导的细胞凋亡不能够激活p53家族成员TAp73以及DNp73的参与。综上所述,MMS诱导的这两种细胞凋亡为p53非依赖性以及p73非依赖性的信号通路介导的,而凋亡的发生与Caspase2从细胞核到细胞质的转移激活及线粒体通路有关。
[Abstract]:MMS, also known as methyl mesylate, is a typical methylation reagent. MMS is an important chemotherapeutic agent for cancer. It can lead to the formation of DNA double strand break (DSB). It is an important marker for many anticancer drugs to exert their efficacy. Many studies have shown that MMS can induce p53 dependent signaling pathway mediated apoptosis in different cell lines. However, when p53 gene was knocked out, the cells still showed similar sensitivity to MMS drugs, thus proving the existence of p53 independent signaling pathway in the process of inducing apoptosis. In order to further study the specific mechanism of p53 independent signaling pathway in MMS induced apoptosis, an experimental model of MMS induced apoptosis was established. Two cell lines, H1299 and Hep3B cells with p53 gene deletion, were selected. Five concentrations of MMS were determined, which were 50 渭 m, 100 渭 M, 200 渭 M, 400 渭 M and 800 g / m, respectively. The results showed that when the exposure time of MMS was 12 h and the concentration of 50 渭 M was 100 渭 M, 400 渭 M and 800 渭 M, the focus of 纬 H2AX appeared in the two cell lines, that is, DNA damage occurred in different degree. When the exposure time of MMS was 12 h and the concentration of 800gM was 400 渭 M, apoptosis occurred in both cell lines. This process of apoptosis involves the reduction of mitochondrial membrane permeability, the transfer of Caspase2 from nucleus to cytoplasm, the release of cytochrome C, and the activation of Caspase9. However, apoptosis induced by MMS could not activate TAp73 and DNp73 of p53 family members. In conclusion, the apoptosis induced by MMS is mediated by p53 independent and p73 independent signaling pathways, and the apoptosis is related to the activation of Caspase2 from nucleus to cytoplasm and mitochondrial pathway.
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R114

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