母亲MTHFR、eNOS基因多态性及环境因素与NTDs关系的研究

发布时间：2019-01-23 19:02

【摘要】：目的：探讨影响贵州省神经管畸形(neural tube defects, NTDs)高发的可疑危险因素，研究母亲5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene-tetrahydrofolate reductase, MTHFR）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric synthase, eNOS）基因多态性及环境因素与子代发生NTDs之间的关系，并研究危险因素之间是否存在交互作用，为预防NTDs的发生提供理论依据。方法：监测2010年10月至2013年11月间贵州省9个地、州、市所属的63所医院生育NTDs患儿或被B超诊断为NTDs患儿而引产的母亲155例组成病例组，选取155例同期与病例组孕周相近的孕妇或生育正常儿的母亲组成对照组，采用1:1匹配的病例对照研究的流行病学方法。对两组研究对象进行问卷调查，并采集其肘静脉血各5ml，提取DNA。应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性(polymerase chainreaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)的方法对研究对象的MTHFR基因677位点及eNOS基因894位点和4a/b位点多态性进行检测；应用高效液相色谱法检测病例组和对照组的糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin Alc, HbAlc)值，组间比较用配对t检验；采用SPSS13.0软件对数据进行单因素和多因素条件logistic回归分析，并应用GMDR vo.7软件对基因－基因、基因－环境之间的交互作用进行分析。结果：MTHFR基因677位点突变存在三种类型：野生型CC、纯合突变型TT和杂合突变型CT，PCR产物测序的结果与限制性酶切结果相吻合。其基因型频率（CC、TT、CT）在病例组的分布为47.7％、21.3％、31.0％，对照组为63.9％、7.1％、29.0％，，经卡方检验两种基因型频率的差异具有统计学意义（χ2＝14.69, P＝0.001）；等位基因频率(C、T)在病例组的分布为64.8％和35.2％，对照组为78.4％和21.6％，经卡方检验两种等位基因频率的差异具有统计学意义（χ2＝13.99, P＝0.000）。 eNOS基因894位点突变存在三种类型：野生型GG、杂合突变型GT和纯合突变型TT， PCR产物测序的结果与限制性酶切结果相吻合。其基因型频率（GG、GT、TT）在病例组的分布为61.3％、29.7％、9.0％，对照组为76.1％、20.7％、3.2％，两种基因型频率的差异经卡方检验具有统计学意义（χ2＝9.26, P＝0.010）；等位基因频率(G、T)在病例组的分布为76.1％和23.9％，对照组为86.5％和13.5％，病例组与对照组采用卡方检验，两组等位基因频率的差异具有统计学意义（χ2＝10.86, P＝0.001）。 eNOS基因4a/bVNTR由a等位基因和b等位基因构成，分为a/a、a/b和b/b三种基因型。在本次实验中对照组无a/a基因型、病例组也仅发现一例。其基因型频率（a/a、a/b、b/b）在病例组的分布为0.6％、12.3％、87.1％，对照组为0.0％、10.3％、89.7％，经卡方检验两种基因型频率的差异无统计学意义（χ2＝0.14, P＝0.704）；等位基因频率(a、b)在病例组的分布为93.2％和6.8％，对照组为94.8％和5.2％，经卡方检验两种等位基因频率的差异无统计学意义（χ2＝0.72, P＝0.397）。应用高效液相色谱仪检测HbAlc，分析HbAlc水平与NTDs的相关性。结果显示病例组HbAlc水平（5.141.36）明显高于对照组HbAlc水平（4.830.38），两组间的差异具有统计学意义（t=2.09, P＝0.040）。将单因素条件logistic回归分析中具有统计学意义的11项变量分别引入到多因素条件logistic回归分析，最终进入模型的变量有6项：被动吸烟、文化程度、食用发芽马铃薯、妊娠剧吐、MTHFR基因677位点突变、eNOS基因894位点突变，其OR值及95％CI分别为3.430（1.608～7.317）、0.488（0.320～0.744）、2.017（1.155～3.523）、2.868（1.407～5.849）、2.051（1.258～3.344）、3.650（1.902～7.003）。交互作用分析结果显示如下：将多因素分析有意义的可疑危险因素录入至GMDRv0.7软件，对基因与基因、基因与环境之间的交互作用进行分析。结果显示，有一个模型的交叉检验一致性均为10/10，平衡准确度为0.6439，说明MTHFR基因677位点突变、eNOS基因894位点突变、妊娠剧吐、文化程度、被动吸烟和食用发芽马铃薯之间存在交互作用。结论：MTHFR基因677位点突变、eNOS基因894位点突变可能与贵州省NTDs的发生有关。 HbAlc水平与NTDs的发生具有相关性。母亲高文化程度是NTDs发生的独立保护因素。 MTHFR基因677T位点突变、eNOS基因894位点突变、妊娠剧吐、文化程度、被动吸烟和食用发芽马铃薯间存在交互作用。
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【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114

【参考文献】