十溴联苯醚对小鼠肝脏组织的氧化应激水平及细胞色素C表达水平影响的研究

发布时间：2019-07-25 10:00

【摘要】：目的研究十溴联苯醚（decabromodiphenylether, BDE-209）对小鼠肝脏组织诱导的氧化应激水平变化以及释放细胞色素C（Cytochrome C，Cyt-C）的线粒体凋亡通路蛋白表达的影响，为深入研究BDE-209的肝脏毒性机制提供依据。 方法3周龄雄性BALB/c小鼠28只，按随机原则分为4组，每组小鼠7只：即生理盐水组、溶剂对照组、低剂量组（BDE-209，200mg/kg）和高剂量组（BDE-209，500mg/kg）；小鼠按10ml/kg体重剂量经口灌胃染毒，连续6周，每周处理6次；六周后脱眼球取血，断头处死小鼠，冰盘上分离脏器并称重；分别于光镜和电镜下观察各组小鼠肝脏的组织形态学和超微结构改变；测定各组小鼠血清谷丙氨酸转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、测定肝脏丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽（GSH）的含量，并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏中Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-9以及caspase-3蛋白的表达情况。 结果各剂量组肝脏重/体重间无统计学差异；高、低剂量染毒组小鼠血清ALT分别为（95.9243±10.8066）U/L、（87.7352±7.9656）U/L，二者均高于生理盐水组的（62.0655±8.3967）U/L和溶剂对照组的（62.5168±8.3400）U/L，差异有统计学意义（P0.05）；高、低剂量染毒组小鼠血清AST分别为（176.8746±12.3145）U/L、（167.3821±8.4494）U/L，二者均高于生理盐水组的（130.8888±8.1633）U/L和溶剂对照组的（131.3715±7.4749）U/L，差异有统计学意义（P0.05）；高、低剂量染毒组小鼠肝脏组织MDA分别为（0.1915±0.0674）nmol/mg prot、（0.1737±0.0414）nmol/mg prot，均高于生理盐水组的（0.0773±0.0226）nmol/mg prot和溶剂对照组的（0.0790±0.0340）nmol/mg prot，差异有统计学意义（P0.05）；高、低剂量染毒组小鼠肝脏组织T-SOD活性分别为（0.2867±0.0401）U/mg prot、（0.3064±0.0219）U/mg prot，均低于生理盐水组的（0.3608±0.0687）U/mg prot和溶剂对照组的（0.3596±0.0343）U/mg prot，差异有统计学意义；高剂量染毒组小鼠肝脏GSH含量为（0.0647±0.0235）mg GSH/g prot，低于生理盐水组（0.0987±0.0189）mg GSH/g prot、溶剂对照组（0.0994±0.0124）mg GSH/g prot、低剂量染毒组（0.0894±0.0314）mg GSH/g prot，差异有统计学差异（P0.05）。光镜下观察染毒组小鼠肝脏出现肝细胞浊肿，胞浆内有细小脂质空泡，肝索排列发生改变，部分肝细胞模糊，空泡化显著。电镜下观察染毒组小鼠肝脏出现染色质浓缩聚合，线粒体膨胀，内质网增大。Western blot结果显示：BDE-209染毒组肝脏中Bax/Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3的表达水平均高于对照组组，差异有统计学意义（P0.05）。 结论BDE-209可以引起肝脏组织脂质过氧化指标的改变和组织形态学以及超微结构的改变。BDE-209导致肝脏的氧化损伤可能是动物肝脏毒性基础之一。同时细胞线粒体的形态学改变以及Bax/Bcl-2表达的变化可能导致Cyt-C的释放，激活经典凋亡途径，诱导caspase-9、caspase-3表达的变化。 目的BDE-209是一种对生态环境和生物的健康构成潜在的威胁的持久性有机污染物。研究一已经证实了BDE-209可以引起小鼠肝脏组织氧化损伤以及Cyt-C相关线粒体凋亡通路关联性蛋白的表达变化，因此本研究探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对BDE-209致小鼠肝脏组织氧化损伤的保护作用及Cyt-C相关的线粒体凋亡通路相关蛋白表达的改变情况。 方法3周龄雄性BALB/c小鼠21只，随机分为3组，即生理盐水组、染毒组（BDE-209组，200mg·kg~(-1)·d~(-1)）和干预组（BDE-209+NAC组，在给予BDE-209前0.5h经腹腔注射给予NAC100mg·kg~(-1)·d~(-1)）每组7只，小鼠按10ml/kg体重剂量经口灌胃染毒，连续6周，每周处理6次；六周后脱眼球取血，断头处死小鼠，冰盘上分离脏器并称重；分别于光镜和电镜下观察各组小鼠肝脏的组织形态学和超微结构改变；测定各组小鼠血清ALT和AST活性、测定肝脏MDA含量、SOD活力、GSH的含量，Western blot法检测肝脏中Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3蛋白的表达情况。 结果各染毒组小鼠肝重/体重间无统计学差异；染毒组小鼠血清ALT为（87.7352±7.9656）U/L，高于生理盐水组的（62.0655±8.3967）U/L和干预组的（65.9243±10.8066）U/L，差异具有统计学意义（P0.05）；染毒组小鼠血清AST为（167.3821±8.4494）U/L，高于生理盐水组的（130.8888±8.1633）U/L和干预组的（136.7846±8.3145）U/L，差异有统计学意义（P0.05）；染毒组小鼠肝脏组织MDA含量为（0.1737±0.0414）nmol/mg prot，高于生理盐水组（0.0773±0.0226nmol/mg prot）及干预组（0.0821±0.0171nmol/mg prot），差异具有统计学意义（P0.05）；染毒组小鼠肝脏组织SOD活力（0.3064±0.0219U/mg prot）低于生理盐水组（0.3608±0.0687U/mg prot）和干预组（0.3579±0.0421U/mg prot），差异有统计学意义（P0.05）；染毒组小鼠肝脏组织GSH含量（0.0894±0.0314mgGSH/g prot）低于生理盐水组（0.0987±0.0189mg GSH/g prot）和干预组（0.0979±0.0241mg GSH/g prot），且差异有统计学意义（P0.05）；Western blot结果显示:染毒组小鼠肝脏组织Bax/Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3的表达水平均高于生理盐水组及干预组，且差异有统计学意义（P0.05）；光镜下观察染毒组小鼠肝脏出现肝细胞浊肿，胞浆内有细小脂质空泡，肝索排列发生改变，部分肝细胞模糊，空泡化显著，生理盐水组和干预组小鼠肝脏组织上述变化不显著；电镜下观察染毒组小鼠肝脏出现染色质浓缩聚合，线粒体膨胀，内质网增大，生理盐水组和干预组小鼠肝脏组织上述变化不显著。 结论N-乙酰半胱氨酸对BDE-209引起的肝脏毒性具有一定的保护作用。
【图文】：

差异有统计学意义（P<0.05）；染毒组AST活性高于生理盐水组及溶剂对照组，且差异有统计学意义（P<0.05）（表1-3，图1-1、1-2）。表1-3 BDE-209染毒对小鼠血清ALT、AST活性的影响（X ±S）Tab 1-3 Effect on serum ALT and AST of mice exposed to BDE-209 ( X ±S)注：*与生理盐水组比 P<0.05；#与溶剂对照组比 P<0.05；☆与低剂量组比 P<0.05组别 数量（n） ALT（U/L） AST（U/L）生理盐水组 7 62.0655±8.3967 130.8888±8.1633溶剂对照组 7 62.5168±8.3400 131.3715±7.4749低剂量组 7 87.7352±7.9656*# 167.3821±8.4494*#高剂量组 7 95.9243±10.8066*# 176.8746±12.3145*#

注：*与生理盐水组比P<0.05；#与溶剂对照组比P<0.05图1-2 BDE-209染毒各组小鼠血清AST的比较Fig1-2 Comparison of AST in serum of groups exposed to BDE-2093.2.2 BDE-209染毒后小鼠肝脏MDA含量的改变：检测各组小鼠肝脏组织中的MDA含量，结果如表1-4所示：溶剂对照组和生理盐水对照组之间对比无差异；低剂量组MDA含量高于生理盐水组及溶剂对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；高剂量组MDA含量高于生理盐水组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表1-4，，图1-3）。表1-4 BDE-209染毒对小鼠肝脏中MDA含量影响（X ±S，nmol/mg prot）Tab 1-4 The content of MDA in liver among groups exposed to BDE-209( X ±S,nmol/mg prot)
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R114

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本文编号：2519012