hOGG1基因在Cr（Ⅵ）诱导L-02肝细胞线粒体DNA氧化损伤中的作用

发布时间：2020-02-07 13:16

【摘要】：目的：在体外试验系统,初步探讨Cr(Ⅵ)诱导线粒体DNA氧化损伤情况及hOGGl基因的修复作用,为进一步阐明Cr(Ⅵ)诱导线粒体氧化损伤的机制提供线索。方法：以L-02肝细胞为受试细胞,通过MTT试验检测不同浓度Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞存活率的影响,筛选出Cr(Ⅵ)浓度高(32umol/L)、中(8μmol/L)、低(2μmol/L)和空白对照(0μmol/L)进行后续试验,染毒时间为24h。通过多功能荧光酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)及ATP的浓度,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测hOGG1基因mRNA的表达,酶标仪检测线粒体内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot方法检测线粒体内8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(hOGG1蛋白)含量,分光光度计检测细胞内过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果： 1.Cr(Ⅵ)引起L-02肝细胞存活率降低：Cr(Ⅵ)在2-256μmol/L处理浓度范围内(处理24h),能明显引起L-02肝细胞存活率的降低(P0.05),处理浓度和细胞存活率之间存在明显负相关(r=-0.924,P0.01)。根据细胞存活率选出适当的Cr(Ⅵ)处理浓度：高(32μmol/L)、中(8μmol/L)、低(2μmol/L)和空白对照(0μmol/L)进行后续试验。 2.Cr(Ⅵ)引起L-02肝细胞活性氧簇(ROS)含量增加：与对照组比较,2μmol/L Cr(Ⅵ)处理浓度组细胞内ROS平均含量无明显增加(p0.05),8、32μmol/L Cr(Ⅵ)处理组细胞内ROS平均含量逐渐增加(p0.05),且随着Cr(Ⅵ)处理浓度的增大,细胞内ROS平均含量随之增加,两者之间存在明显正相关(r=0.942,P0.01)。 3.Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞能量代谢的影响：与对照组相比,2μmol/LCr(Ⅵ)低浓度组细胞内ATP浓度无变化(p0.05);8、32μmol/LCr(Ⅵ)浓度组细胞内ATP浓度明显降低(P0.05),且随着Cr(Ⅵ)处理浓度的增大,细胞内ATP浓度随之降低,两者之间存在明显负相关(r=-0.967,P0.05)。 4.Cr(Ⅵ)对线粒体内8-OHdG含量的影响：与对照组相比,2μmol/L Cr(VI)低浓度组线粒体内8-OHdG平均含量无变化(p0.05)；8、32μmol/LCr(VI)浓度组线粒体内8-OHdG平均含量明显降低(P0.05),且随着Cr(Ⅵ)处理浓度的增大,线粒体内8-OHdG含量随之增加,两者之间存在明显正相关(r=0.816,P0.05)。 5.Cr(Ⅵ)对hOGG1基因表达的影响：与对照组相比,2μmol/L处理组hOGG1基因mRNA表达水平及线粒体内hOGG1蛋白含量均明显增加(p0.05)；8μmol/L浓度组hOGG1基因mRNA表达水平及线粒体内hOGG1蛋白含量与对照组相比无明显改变(p0.05),但低于2μmol/L处理组(p0.05);32μmol/L浓度组两者均明显降低(p0.05),且在2-32μmol/L Cr(VI)处理浓度范围内,hOGG1基因mRNA表达水平及线粒体内hOGG1蛋白含量逐渐降低。 6.Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞抗氧化酶活力的影响：与对照组相比,2μmol/L浓度组细胞内SOD、CAT和GSH-PX平均活力明显增加(p0.01);8μmol/L浓度组细胞内SOD和CAT平均活力明显降低(p0.01),细胞内GSH-PX平均活力明显升高,且高于2μmol/L浓度组(p0.01);32μmol/LCr(VI)浓度组细胞内SOD、CAT和GSH-PX平均活力均明显降低。结论： Cr(Ⅵ)可诱导细胞内ROS水平增加,使mtDNA受到氧化损伤,线粒体内8-OHdG含量增加,影响ATP的产生,导致细胞发生能量代谢障碍。而hOGG1基因表达水平及抗氧化酶活力(SOD、CAT和GSH-PX)的改变,影响了线粒体DNA的修复。总之,hOGG1基因在Cr(Ⅵ)诱导线粒体DNA氧化损伤中起到了重要的作用。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R114

【参考文献】