克伦特罗快速检测方法的研究

发布时间：2020-02-07 18:54

【摘要】：克伦特罗是β肾上腺素的一种，临床用来治疗哮喘等呼吸系统疾病，由于可以促进动物脂肪的重分配，提高动物瘦肉率，近年来被作为“瘦肉精”非法添加到动物饲料中，严重危害了消费者的身体健康，打击消费者的信心。国内外关于克伦特罗检测方法的报道已经有很多，如高效液相色谱法、高效气相色谱-质谱联用法、酶联免疫法、金标试纸法、生物传感器法等。这些方法存在着各样的缺点，均不能同时满足企业批量、现场、快速检测克伦特罗的的要求，针对以上问题，本文以血清中的克伦特罗为对象，研究了一种利用碱性高锰酸钾检测克伦特罗的新方法。 本文选择了邻甲氧基苯酚、甲萘酚、茜素、N-（1-萘基）-乙二胺、高锰酸钾五种显色剂检测克伦特罗，每种显色剂的最佳反应条件分别如下。 邻甲氧基苯酚检测克伦特罗的最佳反应条件：KHSO4浓度为0.36mol/L，NaNO2浓度为0.72mol/L，H_2NSO_3NH_4浓度为0.11mol/L，体积比为0.6:0.2:1，检出限为5.4μg/mL；甲萘酚检测克伦特罗的最佳反应条件：NaNO2浓度为0.10mol/L，HCL浓度为1.50mol/L，，H_2NSO_3NH_4浓度为0.15mol/L，体积比为1:1:1，检出限为4.0μg/mL；茜素检测克伦特罗的最佳反应条件：茜素浓度为5.0×10~(-4)mol/L-，乙酸浓度为1.0×105mol/L，体积比为1:1，检出限为4.0μg/mL；N-（1-萘基）-乙二胺检测克伦特罗的最佳反应条件：HCL浓度为0.2mol/L，NaNO2浓度为0.1mol/L，H_2NSO_3NH_4浓度为0.3mol/L，体积比为1:1:1，检出限为1.2μg/mL；碱性高锰酸钾检测克伦特罗的最佳反应条件：NaOH浓度为1.5mol/L，KMnO_4浓度为5.0×10-4g/mL，NaOH：KMnO_4体积比为10:1，检出限为1.0ng/mL。 选择碱性高锰酸钾显色剂检测血清中的克伦特罗，通过正交试验设计和二次通用旋转分析，确定了最佳反应条件，即NaOH浓度为0.468mol/L，KMnO_4浓度为0.327×10~(-3)g/mL，NaOH：KMnO_4（V1：V2）=0.159；在此反应条件下以血清中克伦特罗的浓度（ppb）为横坐标，反应吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线方程如下：y=0.6614-0.1057x2（R=0.9973）；确定了此方法的检出限为1ppb；对盐酸肾上腺素、莱克多巴胺和沙丁胺醇有着良好的特异性；此方法的批内变异系数在2.10%-16.67%之间波动，批间误差在0.71%-7.44%之间波动，重现性良好；通过碱性高锰酸钾比色法与酶联免疫反应（ELISA）标准点和实际样品测定比对试验，发现前者的标准点拟合误差和实际样品回收率测定误差均低于后者，因此碱性高锰酸钾法的稳定性优于ELISA法。 依据碱性高锰酸钾与克伦特罗反应的原理，以耐碱PVC板材为载体制做快速检测试纸条，检出限为1ppb；试验表明4℃下速测试纸条的稳定期为三个月，25℃下稳定期为两个月；盐酸肾上腺素、莱克多巴胺和沙丁胺醇浓度高达100ng/mL时，快速检测试纸条仍无法将其检出，试验证明试纸条稳定性和特异性均良好。 本文通过一系列试验研究，确定了碱性高锰酸钾检测血清中克伦特罗的最佳条件，验证了方法的特异性与重现性，并根据此反应研制了克伦特罗速测试纸条。证明了碱性高锰酸钾检测克伦特罗是一种快速、灵敏、便捷、价廉的检测方法，为克伦特罗的快速、现场检测提供了理论依据。
【图文】：

”就是兽药中典型的一种，又名克伦特罗（Clenbu于治疗哮喘、支气管炎等呼吸系统疾病，属于β-肾够减少脂肪沉积，有效促进肌肉组织生长和蛋白质合的瘦肉率，克伦特罗曾一度广泛应用于畜牧业[4]。由蓄积，会引发食用者的中毒现象，因此CLB作为兽数国家被相继禁止，包括中国政府。然而一些不法商法在饲料中添加CLB，给我国的人民健康和畜产品外研究现状特罗性质简介（Clenbuterol Hydrochloride,CLB），又名羟甲叔丁肾8N2OCl2·HCl，分子量313.7Da，是一种β2-肾上腺素的一种衍生物，无臭，味微苦，性状为白色或类白色5℃[6]，易溶于乙醇、甲醇、水，微溶于氯仿，不溶于下[8]：

染的肉食品要煮熟食用，但研究表明，100℃高温下克伦特罗结构依然稳定，126℃高温烹炸5min，CLB含量会减为一半。1.1.2 克伦特罗作为“瘦肉精”使用的药用原理及危害克伦特罗首次作为兽药添加剂使用是在1984年[13]，一家美国公司意外将5-10倍(>1μg/kg·d)高于治疗剂量的CLB加入动物饲料，发现动物生长明显被促进、胴体品质有显著改善、牲畜的瘦肉率也有大幅提高，后来此发现在养殖业方面被某些国家应用。我国一些科研机构也于20世纪80年代向养殖户和饲料企业错误地推广CLB。克伦特罗能以10%-15%的百分率提高瘦肉率和饲料转化率，同时降低8%-15%骨骼肌脂肪[14]，因此CLB被饲料企业和养殖户称做“瘦肉精”。克伦特罗实现脂肪重分配的原理为[15]：CLB刺激分泌肾上腺素促进腺苷酸环化酶的产生，从而提高了高环磷酸腺苷（cAMP）的浓度，促进了激素敏感脂酶的活化，最终加快脂肪分解，并使游离脂肪酸（FFA）从血液进入肌肉，为蛋白质的进一步合成提供基础物质；同时，作为神经调节剂的一种，CLB可使血液中Mg2+（具有抑制肌肉兴奋作用）浓度降低，使细胞膜的通透性改善，重新分配肌体内的营养以及代谢调控，即减弱动物体内的脂肪合成和蛋白质分解等生化反应，从而使组织中的氮沉积。CLB实现“瘦肉精”作用的原理图如下：
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R155.5

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