《华北理工大学》2015年硕士论文

  本文关键词：二氧化硅刺激的离体A549细胞AQP-1、AQP-4表达研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《华北理工大学》 2015年

二氧化硅刺激的离体A549细胞AQP-1、AQP-4表达研究

张芳  

【摘要】：目的研究二氧化硅(Si O2)刺激的人II型肺泡上皮细胞系A549细胞所构造的矽肺早期急性肺损伤模型中水通道蛋白1(AQP-1)和水通道蛋白4(AQP-4)的表达及意义。方法1将培养的生长良好的对数生长期人II型肺泡上皮细胞系A549细胞分为对照组、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h染尘组和抑制剂组,各染尘组分别以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液刺激0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h,抑制剂组先分别以浓度为200μmol/L的AQP-1抑制剂Hg Cl2孵育3min(即检测AQP-1 m RNA相对表达水平的抑制剂组)或浓度为100μmol/L的AQP-4抑制剂TGN-020孵育2.0 h(即检测AQP-4 m RNA相对表达水平的抑制剂组),再以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液刺激1.0 h,另设不予任何处理的对照组;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测AQP-1和AQP-4 m RNA的相对表达水平。2将A549细胞分为对照组、3.0、6.0、12.0、24.0 h染尘组和抑制剂组,各染尘组分别以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液分别刺激3.0、6.0、12.0、24.0 h,抑制剂组先分别以浓度为200μmol/L的AQP-1抑制剂Hg Cl2孵育3min(即检测AQP-1蛋白表达水平的抑制剂组)或浓度为100μmol/L的AQP-4抑制剂TGN-020孵育2.0 h(即检测AQP-4蛋白表达水平的抑制剂组),再以质量浓度为50mg/L的Si O2混悬液刺激6.0h,另设不予任何处理的对照组;分别采用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测AQP-1和AQP-4的蛋白表达。3采用SPSS 19.0软件进行统计学分析,计量资料经正态性检验符合正态分布,以xˉ±s表示;多组组间均数比较采用单因素方差分析(Oneway ANOVA),均数间两两比较采用LSD法;以P0.05为差异具有统计学意义。结果1 Real-time PCR法分析结果显示:与对照组相比,Si O2刺激后A549细胞AQP1和AQP-4 m RNA相对表达水平均呈现先升高后逐渐下降的趋势,均于Si O2刺激1.0h达高峰(P0.01),于Si O2刺激8.0h趋于正常水平(P0.05)。2免疫细胞化学法示AQP-1和AQP-4于A549细胞的胞浆和胞核中均有表达。3免疫印迹法和免疫细胞化学法定量分析结果均显示:与对照组相比,Si O2刺激后A549细胞AQP-1和AQP-4蛋白相对表达水平均呈现先升高后逐渐下降的趋势,均于Si O2刺激6.0h达高峰(P0.01),但于Si O2刺激24.0h后仍未下降至正常水平(P0.01)。4抑制剂组AQP-1和AQP-4 m RNA相对表达水平及蛋白表达水平均高于对照组,但均低于Si O2刺激相同时间的染尘组(P0.01)。结论Si O2刺激使A549细胞AQP-1和AQP-4的表达增高,AQP-1和AQP-4的特异性抑制剂可分别减弱Si O2刺激引起的AQP-1和AQP-4的表达增高,推断AQP-1和AQP-4可能参与了Si O2刺激引起的矽肺早期急性肺损伤的发生发展过程。

【关键词】：
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R135.2
【目录】：

【参考文献】

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1 郭亮;唐忠志;张端莲;刘非凡;陈忠庆;程青;邬明;;乌司他丁对急性肺损伤组织中水通道蛋白及Fas表达的研究[J];重庆医学;2009年22期

2 陆月明,孙波;急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征临床流行病学研究进展[J];中华急诊医学杂志;2003年01期

3 刘锦源;张石江;金宇;王媚;解卫平;王虹;;水通道蛋白1在肺腺癌组织中的表达和分布[J];南京医科大学学报(自然科学版);2008年04期

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本文编号：260900