生菜中细菌对诺如病毒食源性污染的影响

发布时间：2020-04-06 11:38

【摘要】：目的诺如病毒(Noroviruses,No Vs)是导致非细菌性急性胃肠炎最主要的病原体,新鲜果蔬(生菜、草莓等)是传播No Vs的重要载体。本文通过高通量测序对杭州市某农田生菜和土壤中的核心菌群进行分析,利用平板分离分离培养生菜表面细菌,并筛选组织血型抗原(Histo-blood group antigens,HBGAs)阳性细菌,检测高温和紫外消毒作用下HBGAs阳性细菌对GⅡ.4型No Vs耐受力的影响,以及紫外照射和高温种植环境下HBGAs阳性细菌对GⅡ.4型No Vs在生菜上残留以及感染力的影响,为果蔬表面No Vs的预防与清除提供理论依据。方法1、利用高通量测序分析杭州市某农田生菜表面和土壤中的核心菌群,并通过平板分离培养生菜表面细菌,16Sr DNA鉴定并绘制系统进化树。2、通过悬浮试验测定细菌对GⅡ.4型No Vs的吸附力,并利用透射电子显微镜确定病毒的吸附部位;使用ELISA的方法筛选细菌HBGAs。3、利用RT-q PCR以及RNase处理结合RT-q PCR的方法测定紫外线、高温消毒下HBGAs阳性细菌对No Vs耐受力的影响。4、紫外消毒生菜叶,通过点接种的方式染菌处理,利用RT-q PCR以及RNase处理结合RT-q PCR的方法检测紫外线照射和高温种植环境下HBGAs阳性细菌对生菜表面No Vs残留以及感染力的影响。结果1、生菜样本核心菌群主要以假单胞菌属、不动杆菌属、节杆菌属、希瓦氏菌属和血杆菌属等为主;土壤样本主要以节杆菌属、酸杆菌属、鞘氨醇单胞菌属、肾杆菌属、假单胞菌属等为主。分离得到的25株细菌主要包括7株假单胞菌属细菌、4株微杆菌属细菌、3株鞘氨醇杆菌属细菌和3株短状杆菌属细菌等。2、从生菜样本中分离得到的细菌对GⅡ.4型No Vs都有一定的吸附力,病毒主要吸附于细菌胞体,大部分细菌可表达HBGAs。3、紫外消毒作用下,细菌对No Vs的耐受力有影响(p0.05),细菌能增强No Vs的耐受力;高温消毒作用下,从核酸量变化角度来看,假单胞菌属细菌SC006和SC023、鞘氨醇杆菌属细菌SC015对No Vs的耐受力有影响(p0.05),而从病毒完整性角度来看,细菌对No Vs耐受力的影响与阴性对照组相比无明显差别(p0.05)。4、紫外线照射下,与阴性对照组相比,沃氏菌属细菌SC042对生菜上No Vs的残留有影响(p0.05),鞘氨醇杆菌属细菌SC015和沃氏菌属细菌SC042对生菜上No Vs的感染力有影响(p0.05);37°C高温种植环境下,7d以内细菌对No Vs在生菜表面的残留以及感染力没有影响(p0.05)。结论生菜样本菌群丰富,核心菌群主要以假单胞菌属、不动杆菌属、节杆菌属、希瓦氏菌属、血杆菌属等为主与土壤核心菌群存在较大差异。分离出的25株细菌大部分对No Vs具有一定吸附力并且普遍可表达HBGAs。在紫外消毒过程中,细菌能提高No Vs的耐受力。90°C高温消毒下,部分细菌能延缓病毒核酸被破坏降解,但病毒对高温的耐受力并无多大变化。在37°C高温生长环境下,7d以内HBGAs阳性细菌对No Vs在生菜表面的残留以及感染力没有影响。在紫外照射下,某些HBGAs阳性细菌对生菜表面No Vs的残留以及感染力有影响,HBGAs阳性细菌可能有利于生菜上No Vs的食源性传播。
【图文】：

电泳图,电泳图,生菜,序列

图 1-1 PCR 扩增产物电泳图HUR 软件对获得的序列按 97%的序列相似度进行归并和 OT中丰度最高的序列作为该 OTU 的代表序列，随后计算两样本图展现生菜样本与土壤样本之间共有的和独有的 OTU 所占菜与土壤之间共有的 OTU 有 88 个，生菜上独有的 OTU 有U 有 1620 个，表明采样的生菜上微生物群落与其种植地土壤差异。图 1-2 OTU 维恩图

维恩图,生菜

图 1-1 PCR 扩增产物电泳图软件对获得的序列按 97%的序列相似度进行最高的序列作为该 OTU 的代表序列，随后计现生菜样本与土壤样本之间共有的和独有的土壤之间共有的 OTU 有 88 个，生菜上独有1620 个，表明采样的生菜上微生物群落与其种。
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R155.5

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