内质网应激在十溴联苯醚诱导SerW3细胞系凋亡的研究

发布时间：2017-03-22 14:14

  本文关键词：内质网应激在十溴联苯醚诱导SerW3细胞系凋亡的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的体外研究十溴联苯醚(decabromodiphenyl ether, BDE-209)暴露对小鼠睾丸支持细胞系(SerW3)的细胞凋亡损伤水平,初步讨论BDE-209对SerW3细胞凋亡的影响和诱导凋亡的机制,为研究BDE-209致SerW3细胞凋亡的机制提供科学依据。方法培养小鼠睾丸支持细胞系(SerW3)之后暴露于BDE-209中,总共分为5个剂量组,分别为对照组(含有1%DMSO的培养基)和剂量组(剂量分别为10μg/ml BDE-209、20μg/ml BDE-209、30μg/ml BDE-209、40μg/ml BDE-209)染毒24h后,每组的细胞形态差异用倒置显微镜来观察；MTT比色分析法检测每组细胞存活率；乳酸脱氢酶细胞毒性检测；Annexin V/PI双染法和Hoechst染色的方法来检测细胞凋亡水平；免疫印迹法检测内质网应激发生中的caspasel2、GRP78和CHOP蛋白的表达。结果倒置显微镜观察各处理组的SerW3细胞形态,对照组的细胞生长状态良好,胞体为宽大的柱状或不规则形状,有多个突起,胞核为卵圆形或不规则形,细胞铺展成膜状单层。染毒组中的细胞形态发生了变形现象且细胞膜有发泡现象,随着染毒剂量的增加,突起变短,细胞空泡增加。在20μg/ml BDE-209、30μg/mlBDE-209、40μg/ml BDE-209染毒组的细胞发生了明显的空泡、皱缩,之后脱落,最后消失。MTT法检测SerW3细胞存活率的高低,不同染毒剂量作用24h后与对照组相比,染毒组细胞存活率有所下降,其中10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml剂量组差异具有统计学意义(P0.05)；同一剂量BDE-209染毒,时间剂量效应结果,与对照组相比,各染毒时间下(8h、16h、20h、24h、48h)的细胞存活率均有统计学差异(P0.05)。乳酸脱氢酶细胞毒性检测SerW3细胞,不同剂量染毒24h与对照组相比,染毒剂量组细胞乳酸脱氢酶显著增加,表明随着染毒剂量的增加,对细胞产生的毒性也逐渐增加,染毒剂量为10μg/ml、20μg/ml、 30μg/ml、40μg/ml、组与对照组相比,均具有统计学意义(P0.05); Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的结果为BDE-209染毒组(20μg/ml)与空白对照组比较,第二象限的早凋细胞和第三象限的晚凋细胞比例逐渐增加,第一象限的正常细胞比例反应出了逐渐降低的趋势。而BDE-209+4-PBA组与BDE-209染毒组比较,第二象限的早凋细胞比例减少,第三象限的晚凋细胞比例也减少,而正常细胞的比例则逐渐增加,其分布在第一象限中。Hoechst染色结果中表现为对照组的细胞核位于胞体的一侧,大小正常,呈不对称分布,核仁清晰可见。而各剂量组中可以看出凋亡细胞数量越来越多,各组细胞空泡化严重,细胞体积偏小,明亮染色且鲜艳的染色质凝聚,固缩和破碎的细胞核明显。免疫印迹结果显示：与对照组比较来说,40μg/ml剂量组caspase12蛋白表达增加,caspase 12/p-actin之间差异有统计学意义(P0.05)。30μg/ml剂量组与40μg/ml剂量组的CHOP蛋白与对照组比较后,其表达增加,CHOP/β-actin之间差异有统计学意义(P0.05)。染毒剂量为30μg/ml组、40μg/ml组与对照组之间GRP78蛋白表达增加,GRP78/β-actin之间差异有统计学意义(P0.05)。结论BDE-209染毒可以诱导SerW3细胞凋亡,并且会影响细胞形态,降低细胞的存活率,并与染毒剂量呈现一定的时间和剂量效应关系。而内质网抑制剂和BDE-209共处理后,凋亡细胞较BDE-209染毒组减少。目的体外研究中已证实BDE-209诱导小鼠睾丸支持细胞系(SerW3)凋亡,现体内研究十溴联苯醚对小鼠睾丸组织的凋亡情况。包括形态学电镜观察睾丸组织凋亡情况和Hoechst染色观察组织凋亡情况。方法体内实验中,将52只雄性ICR小鼠,适应性饲养一周,随机方式分为4组,即玉米油组、低剂量组(100 mg/kg BW)、中剂量组(300 mg/kg BW)和高剂量组(500 mg/kg BW),每组13只,经灌胃途径染毒处理6周后脱颈处死,冰浴情况下分离脏器、称重,然后保存在-80℃。电镜观察睾丸组织凋亡情况和Hoechst染色观察组织凋亡情况。结果用透射电子显微镜观察到对照组睾丸生精上皮细胞排列规则,核膜清晰,核仁明显,支持细胞胞体呈宽大的柱状或不规则状,滑面内质网和线粒体较多,细胞核呈卵圆形。低剂量组(100μg/ml BDE-209处理组)支持细胞超微改变不明显,但能看到轻微核染色质浓缩。中剂量组(300μg/ml BDE-209处理组)支持细胞数量减少,部分支持细胞线粒体空泡化、核染色质边集。而高剂量组(500μg/ml BDE-209处理组)变化明显,部分受损严重的细胞可见核染色质凝聚,核膜溶解,核碎裂等征象。Hoechst染色结果可看出对照组细胞核正常大小,位于胞体的一侧,呈不对称分布,核仁清晰可见。各剂量组按照随着染毒浓度的加深,凋亡细胞数量增多,各组细胞空泡化严重,细胞体积偏小,明亮染色且鲜艳的染色质凝聚,固缩和破碎的细胞核明显。结论BDE-209染毒可以使青春期小鼠的睾丸组织发生凋亡现象。
【关键词】：十溴联苯醚 SefW3细胞 细胞凋亡 内质网应激 十溴联苯醚 青春期小鼠 睾丸 凋亡
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 一、内质网应激在十溴联苯醚诱导SerW3细胞系凋亡的研究6-40
• 摘要6-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-22
• 结果22-32
• 讨论32-35
• 参考文献35-40
• 二、十溴联苯醚暴露诱导青春期雄性ICR小鼠睾丸组织凋亡情况的研究40-57
• 摘要40-42
• Abstract42-44
• 前言44-45
• 材料与方法45-48
• 结果48-51
• 讨论51-53
• 结论53
• 参考文献53-57
• 附录57-58
• 致谢58-59
• 综述59-76
• 参考文献66-76

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7 管

本文编号：261680