蛋清粉多肽促进皮肤伤口愈合及其作用机制的研究

发布时间：2020-04-09 09:23

【摘要】：食源性多肽是指通过降解食源性蛋白,并经分离纯化获得的小分子肽段。近年来,食源性多肽由于其降血压、降血脂以及抗菌等生物学活性受到广泛关注,但其在促皮肤细胞迁移及加快伤口愈合等方面的研究较少。鉴于此,在本论文中,我们开展了蛋清粉多肽促进皮肤细胞迁移和创面愈合的作用和调控机制的研究。课题组在前期研究中,采用分步酶解法对蛋清粉进行酶解,并通过超滤及葡聚糖凝胶纯化,分离得到了四个混合多肽组分,分别命名为EWP1、EWP2、EWP3和EWP4。在本研究中,我们首先通过小室迁移(Transwell)实验对四个组分进行筛选,结果显示EWP2组分与其他三个组分相比具有明显的促细胞迁移作用,我们通过小鼠皮肤创伤模型进一步证实EWP2组分可以显著促进小鼠皮肤创面愈合。我们通过液相色谱-质谱联用(LC-MS)对EWP2组份进行分析,得到了22条高丰度小肽序列。我们分两批次随机选取了10条小肽序列进行合成。第一批次共选取四条小肽序列,包括KPHAEVVLR、KVEQGASVDKR、ADQARELIN和VNAIVFK,考察这些小肽对人皮肤成纤维细胞HSF的作用和调控机制。Transwell实验结果显示KPHAEVVLR与其他三条小肽相比能够有效地促进HSF细胞迁移,MTS实验结果表明KPHAEVVLR可促进HSF细胞增殖。我们进一步通过免疫荧光和免疫印迹实验,考察KPHAEVVLR促HSF细胞迁移和增值的作用机制,结果表明KPHAEVVLR可以提高膜结合型Hsp90α的蛋白水平。第二批次共选取六条小肽序列,包括GASVDKR、DKEGKDVL、RVTEQESKPV、INFEKL、LYAEER和LRDILN。以人角质形成细胞Ha Ca T为模型,考察这些合成小肽的促迁移作用。Transwell实验、划痕实验和MTS实验证明小肽INFEKL能够有效促进Ha Ca T细胞迁移和增殖,免疫印迹实验结果提示INFEKL可提高胞质型Hsp90α蛋白水平,并增加培养基中的分泌型Hsp90α含量。我们进一步通过小鼠皮肤创伤模型证实INFEKL可加速小鼠创面愈合,HE染色结果提示INFEKL可加快小鼠创面上皮化进程。本研究创新性地证明蛋清源小分子肽可通过提高胞外或胞内型Hsp90α蛋白水平促进皮肤细胞迁移,加速小鼠皮肤创面愈合,表明食源性多肽在调控细胞迁移方面具有研究潜力和应用价值,为开发新型促皮肤创面愈合类食源性小分子肽提供的研究思路和理论依据。
【图文】：

同浓度的血清情况下都能观察到细胞，而且在 10%的血清中细胞的形态更好，因此我们选择时间为 48 h，，10%的血清浓度作为实验的条件。图2.1 不同血清浓度以及迁移时间HSF的迁移效果2.4.2 筛选有效的促进细胞迁移的混合多肽课题组在前期研究中，采用分步酶解法对蛋清粉进行酶解，并通过超滤及葡聚糖凝胶纯化，分离得到了四个混合多肽组分，分别命名为 EWP1、EWP2、EWP3和 EWP4。确定了 HSF 细胞的 Transwell 实验条件后，我们选择相同的多肽浓度200 μg/mL，探究 EWP1、EWP2、EWP3 和 EWP4 四个组分对于 HSF 细胞迁移的影响。加药处理 48 h 后对细胞进行固定染色，而后用荧光显微镜拍照保存，整理实验结果。结果如图 2.2 所示，相同浓度多肽的作用下，与对照组以及其余三组相比，组份 EWP2 明显增加了穿过小室底部的细胞数量。因此

图 2.2 不同多肽组份对 HSF 细胞迁移的作用图 2.3 不同浓度的 EWP2 对 HSF 细胞迁移的作用2.4.3 动物创伤实验结果上述实验结果证明酶解得到的混合多肽组份 EWP2 能够明显促进 HSF 细胞的迁移，因此我们选择 EWP2 进行后续实验。在皮肤伤口愈合过程中，HSF 细
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R151

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本文编号：2620578