山东省蚊虫分布及蚊传虫媒病毒调查

发布时间：2020-04-20 18:24

【摘要】：背景虫媒病毒(Arbovirus)是指通过吸血节肢动物叮咬敏感的脊椎动物,使脊椎动物发病从而传播疾病的一类病毒。山东省位于中国东部沿海,三面环海,地处黄河下游。省内水系较为发达,湖泊集中分布在鲁中南山丘区与鲁西南平原之间,山东省属于暖温带季风性气候,降水集中,雨热同期。复杂的地质地理条件,为媒介昆虫的滋生繁殖提供了有利条件。山东省在历史上是乙脑高发区,近年来成人乙脑病例出现不断增加的趋势,对于大年龄组人群中乙脑的防控工作应引起重视。山东省关于虫媒病毒的研究较少,对于全省开展的虫媒背景信息的调查也有待完善,而山东省部分地区夏秋季节存在不明原因发热和脑炎病例,因此本研究在2016年和2017年夏季,在山东省的济宁市、临沂市、东营市、济南市、淄博市和烟台市进行了蚊虫标本的采集,并进行了病毒的分离及鉴定。目的开展山东省蚊虫及蚊传虫媒病毒的基线调查,为当地虫媒病毒疾病的预防和控制提供科学依据及数据支持。方法在2016年和2017年在山东省采集蚊虫标本,并使用细胞培养法分离病毒,阳性分离物使用分子生物学技术进行病毒鉴定,使用二代测序获得病毒基因组,新分离病毒用ClustalX2.0、MegAlign、Mega5.2和BioEdit等生物学软件进行核苷酸和氨基酸序列分析及系统进化分析,使用电镜等方法对病毒进行形态学研究。结果1、2016-2017年在山东省济南市、烟台市、东营市、淄博市、临沂市、济宁市共采集蚊虫标本4属5种,共48139只,三带喙库蚊为优势蚊种,占89.77%。济宁市采集的蚊虫数量最多,占总数的25.77%;东营市占总数的24.49%;临沂市占总数的17.05%;济南市、烟台市、淄博市分别占总数的5.77%、3.58%和0.49%。采集生境集中在猪圈,且多为吸饱血的蚊虫。2、对山东省2016-2017年采集的蚊虫标本中的274批进行研磨,利用细胞培养法共分离得到23株病毒,经鉴定,包括21株JEV,1株CppDNV,1株KDV。21株新分离JEV均为基因Ⅰ型。系统进化分析结果显示,与山东2013年分离的两株JEV亲缘关系最近。使用实时荧光RT-PCR方法对274批蚊虫标本检测JEV核酸,结果共有53批阳性,阳性率为19.34%(53/274),所有阳性结果均从三带喙库蚊中检出。对新分离CppDNV非结构蛋白NS1和NS2部分核苷酸序列分析显示,该株与我国其他省市分离株的核苷酸同源性在98.9%-99%,系统进化分析显示所有中国分离株均位于同一进化分支中。新分离KDV为分节段病毒,共分为12个节段,利用Illumina测序方法对其全序进行测定,和NCBI上两株KDV(JKT-7075株与QTM27331株)的同源性比较:与我国蜻蜓目分离株QTM27331核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为86%-99%和88%-99%。结论本研究在山东省采集到了4属5种蚊虫标本。蚊种构成说明三带喙库蚊为优势蚊种。从2种蚊虫标本中分离到了 JEV、KDV和CppDNV。在山东省多个地区、多个蚊种中都分离到JEV并检测到其核酸,提示山东省自然界蚊虫中存在着较高的JEV感染率。首次在山东省分离到KDV,二代测序技术在少见病毒的分析与鉴定中发挥了重要作用,提高了分子生物学分析的效率与准确度。
【图文】：

山东省,三带喙库蚊,蚊虫,淄博市

逦山东大学硕士学位论文逦逡逑２．３山东省各采集点蚊虫标本采集数量及蚊种构成逡逑从山东省各地采集到的蚊虫标本数量来看，济宁市所采集到的蚊虫标本数量逡逑最多，共２３，４０７只，占总数（４８，１３９）的２５．７７％，且三带喙库蚊的数量占绝对逡逑优势；其次为东营市，共采集１丨，７９８只，占总数的２４．４９％，三带喙库蚊的数量逡逑仍占多数；再次为临沂市，共采集８２０９只，占总数的１７．０５％，三带喙库蚊的数逡逑量占绝大多数；济南市、烟台市、淄博市采集蚊虫标本的数量为２７８０只、１７１３逡逑只和２３２只，分别占总数的５．７７％、３．５８％和０．４９％。与其他地市的优势蚊种均逡逑为三带喙库蚊所不同的是，济南市和淄博市都是以骚扰阿蚊、三带喙库蚊为主（图逡逑１．２）。逡逑

病毒分离,分离物,背景信息,蚊虫

逡逑可达＋＋＋－＋＋＋＋（图２．１－（ｃ））；接种Ｃ６／３６细胞７２ｈ后，细胞开始出现脱落、聚逡逑集、破碎，１２０ｈ后病变程度达到＋＋＋－＋＋＋＋（图２．１－⑷）。具体出现细胞病变的逡逑时间和特点见表２．３。逡逑表２．２山东省蚊虫研磨上清阳性分离物详细背景信息逡逑Ｔａｂｌｅ邋２．２邋Ｔｈｅ邋ｂａｃｋｇｒｏｉｍｄ邋ｏｆ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ邋ｆｒｏｍ邋Ｓｈａｎｄｏｎｇ邋ｐｒｏｖｉｎｃｅ逡逑分离物名称逦采集时间逦采集地点逦采集环境逦单管只数逡逑Ｎｕｍｂｅｒ逦Ｉｓｏｌａｔｅ逦Ｔｉｍｅ逦Ｓｉｔｅ逦Ｈａｂｉｔａｔ
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R184.31

【参考文献】