DEHP对胰岛MIN6细胞增殖与周期的影响研究

发布时间：2020-05-09 15:20

【摘要】：目的邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)是广泛存在于日常生活中的塑化剂,被认为是一种能对胰岛β细胞产生毒性作用的环境内分泌干扰物。本研究旨在分析DEHP对胰岛MIN6细胞增殖与周期的影响,进一步阐明DEHP对胰岛MIN6细胞的毒性作用。方法采用小鼠胰岛MIN 6细胞为研究对象,分别用25,50,100μM的DEHP及溶剂对照组(DMSO,0.1%)干预MIN 6细胞48小时。通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测DEHP对MIN6细胞存活率的影响,酶联免疫吸附(ELISA)法检测DEHP对MIN6细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)的影响,流式细胞术(FCM)检测DEHP对MIN6细胞周期的影响,水溶性四唑盐(WST-1)法检测DEHP对MIN6细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,硫代巴比妥酸(TBA)法检测DEHP对MIN6细胞内MDA含量的影响,蛋白免疫印迹(WB)法检测DEHP对MIN 6细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达的影响。结果1.MTT结果显示:25μM,50μM,100μM的DEHP抑制MIN6细胞的存活率(P0.05)。2.GSIS结果显示:在基础葡萄糖刺激下,DEHP不影响MIN6细胞葡萄糖刺激胰岛素的分泌;在高糖刺激下,50μM,100μM的DEHP抑制MIN6细胞葡萄糖刺激胰岛素的分泌(P0.01)。3.SOD活性结果显示:100μM的DEHP抑制MIN6细胞内SOD活性(P0.01)。4.MDA含量结果显示:50μM,100μM的DEHP增加MIN6细胞内MDA含量(P0.001)。5.细胞周期结果显示:25μM,50μM,100μM的DEHP增加MIN6细胞G0/G1期细胞的百分比(P0.01),降低S期和G2/M期细胞的百分比(P0.05)。6.WB结果显示:25μM,50μM,100μM的DEHP降低MIN6细胞中Cyclin D1和CDK4的表达(P0.05)。结论1.DEHP能抑制胰岛MIN6细胞存活率及GSIS,诱导MIN6细胞周期阻滞,下调Cyclin D1和CDK4的表达,其机制可能与氧化应激有关。2.DEHP通过抑制MIN6细胞内SOD的活性,增加MIN6细胞内MDA的产生,进而引起氧化应激。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R114

【参考文献】