抗氧化剂对铀矿尘致人巨噬细胞功能损伤的保护作用

发布时间：2017-03-25 07:05

  本文关键词：抗氧化剂对铀矿尘致人巨噬细胞功能损伤的保护作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 探究铀矿尘对人巨噬细胞功能影响的研究以及四种抗氧化剂(NAC、SOD、CAT、甘露醇)对铀矿尘介导的巨噬细胞损伤保护作用，为降低铀矿尘致肺损伤寻找防护剂提供实验依据。方法 将实验分为对照组(0μg/cm2)和实验组(25、50、100、200和400μg/cm2)，通过MTT法检测铀矿尘对人巨噬细胞(THP-1)存活率影响的时效关系；采用Annexin-V FITC/PI双染法以及Hoechst33258荧光标记法来分析铀矿尘对人巨噬细胞凋亡率和凋亡形态学的影响；经2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色后，采用荧光显微镜及化学/荧光发光仪检测铀矿尘对人巨噬细胞内活性氧(ROS)水平的变化情况；分别用荧光染料JC-10、FLUO-8AM、CMFDA染色后，化学/荧光发光仪检测THP-1巨噬细胞线粒体膜电位、细胞内游离钙离子(Ca2+)及胞内谷胱甘肽(GSH)水平的变化情况；FITC标记的大肠杆菌与不同浓度铀矿尘处理12h后的THP-1巨噬细胞共同孵育2h，化学/荧光发光仪检测其荧光强度，分析铀矿尘对THP-1巨噬细胞吞噬功能的影响；液体悬浮芯片系统检测各实验组细胞因子(IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-8等)时效关系的变化特征。 抗氧化剂(NAC、SOD、CAT、甘露醇)孵育THP-1巨噬细胞后，检测铀矿尘致巨噬细胞损伤后细胞凋亡、凋亡相关指标、吞噬功能以及细胞因子的变化情况，比较研究四种抗氧化剂对铀矿尘致人巨噬细胞功能损伤的保护作用。结果 铀矿尘染毒人巨噬细胞后，细胞存活率呈暴露时间和剂量依赖性下降。胞内ROS的变化水平和细胞凋亡率与染毒剂量呈正相关，上升的ROS水平加快GSH耗竭。同时伴随线粒体跨膜电位的下降与胞内Ca2+水平上升。细胞的吞噬功能随着铀矿尘浓度的升高而逐渐被抑制，低剂量铀矿尘处理时IL-1β、GM-CSF、TNF-α和IL-8等细胞因子的表达量呈逐渐增加状态，加快了炎症反应。 四种抗氧化剂(SOD、CAT、甘露醇、NAC)孵育THP-1巨噬细胞后，存活率较处理前明显上升，凋亡率也呈下降趋势，氧化损伤指标影响的(ROS和GSH变化水平)也呈对应变化趋势。其中，NAC和甘露醇组作用效果最为明显。NAC孵育后较孵育前能明显抑制巨噬细胞吞噬功能的降低，IL-1β、GM-CSF、TNF-α、IL-8等细胞因子的上升幅度较孵育前也明显降低。胞内活性氧自由基(H2O2、O2-·、· OH等)的产生与铀矿尘致人巨噬功能损伤呈正相关，· OH可能是细胞损伤过程中最主要的活性氧自由基，其具体作用机制需要进一步研究。结论1．铀矿尘能诱导THP-1巨噬细胞凋亡，降低细胞存活率，早期铀矿尘致细胞损伤是以凋亡为主的毒性影响。2．铀矿尘可以抑制THP-1巨噬细胞的吞噬功能，可使胞内ROS水平上升以及GSH相对水平含量降低。铀矿尘致巨噬细胞功能损伤过程中，能引起TNF-α、IL-8、TGF-β等细胞因子含量的升高。3．NAC、CAT、SOD、甘露醇四种抗氧化剂对铀矿尘所致的巨噬细胞损伤具有一定的保护作用，其中NAC的保护作用最为明显，，它能使铀矿尘刺激之后的巨噬细胞吞噬功能显著增加，降低ROS水平，提高GSH水平，减少IL-8、TNF-α、GM-CSF等细胞因子的分泌。
【关键词】：铀矿尘 巨噬细胞 吞噬 氧化损伤
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R135.2
【目录】：

• 主要英文缩略语索引4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-18
• 1 实验材料12-13
• 2 实验方法13-17
• 3 数据统计分析17-18
• 结果18-30
• 1 铀矿尘对人巨噬细胞功能损伤的影响18-23
• 2 抗氧化剂对铀矿尘致巨噬细胞损伤保护作用23-30
• 讨论30-34
• 1. 铀矿尘对人巨噬细胞功能损伤的影响30-32
• 2. 抗氧化剂对铀矿尘致巨噬细胞损伤保护作用32-34
• 结论34-35
• 参考文献35-40
• 综述40-46
• 参考文献44-46
• 已发表的论文46-47
• 致谢47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：266814