【摘要】：目的 本课题通过对成年雌性小鼠进行壬基酚溶液灌胃染毒,探讨壬基酚对小鼠卵巢卵泡形态以及雌激素和孕激素水平的影响,研究壬基酚的生殖毒性。方法 将30只雌性昆明种(KM)小鼠,随机分为对照组(玉米油)和低剂量组(25mg/kg)、高剂量组(100mg/kg),每组10只。采用壬基酚溶液灌胃方式染毒,染毒容量为0.1ml/10g,每天1次,每周染毒5天,连续染毒12周。1一般状况及体重:观察动物的一般日常活动、饮水饮食、大便性状等情况,皮肤颜色、皮毛光滑度等变化;2于末次染毒24小时后,摘眼球取血处死小鼠,迅速分离双侧卵巢,称重,计算其卵巢系数;3摘眼球取血后,分离血清,采用酶联免疫吸附法检测血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)及促卵泡生成素(FSH)激素水平;4取卵巢组织,观察小鼠卵巢组织病理学及各级卵泡数目的改变;5制备卵巢单细胞悬液,使用荧光染料(H_2DCFDA)和流式细胞技术检测卵巢细胞活性氧(ROS)水平;6制备卵巢组织匀浆,测定小鼠卵巢一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)活性;7取卵巢组织,采用免疫组织化学方法测定卵巢组织8-OHdG蛋白表达水平;8取卵巢组织,通过TUNEL法测定卵巢细胞凋亡情况。结果 1染毒组与对照组小鼠比较,精神状态萎靡,皮毛光泽度下降,活动减少,偶有稀便,进食、饮水量减少。2对照组、低剂量组及高剂量组小鼠的6周及12周体重分别为(36.56±0.23)g、(33.67±2.76)g、(38.61±2.20)g,(38.54±2.52)g、(38.67±2.76)g、(40.61±2.20)g,差异有统计学意义(F=11.602,P0.05;F=11.963,P0.05),高剂量组小鼠体重增加。3对照组、低剂量组及高剂量组小鼠的卵巢湿重和卵巢系数分别为(0.29±0.13)g、(0.28±0.09)g、(0.17±0.01)g,(0.84±0.46)%、(0.80±0.36)%、(0.43±0.54)%,差异均有统计学意义(F=369.586,P0.05;F=244.713,P0.05),高剂量组小鼠卵巢湿重和卵巢系数明显下降。4对照组、低剂量组及高剂量组小鼠血清E_2、P及FSH激素水平分别为(17.27±1.89)pg/ml、(15.32±2.27)pg/ml、(13.46±2.54)pg/ml,(2.46±0.39)ng/ml、(2.23±0.25)ng/ml、(1.99±0.23)ng/ml,(4.76±1.62)ng/ml、(3.80±0.68)ng/ml、(2.84±0.87)ng/ml,差异均有统计学意义(F=7.188,P0.05;F=6.334,P0.05;F=7.164,P0.05),高剂量组小鼠血清E_2、P及FSH激素水平明显下降。5对照组、低剂量组及高剂量组小鼠的总卵泡数目分别为(29.17±1.47)个、(25.17±1.17)个、(18.17±0.75)个,差异有统计学意义(F=136.098,P0.05),高剂量组小鼠总卵泡数目明显降低。6对照组、低剂量组及高剂量组小鼠卵巢细胞ROS水平分别为70.37±9.85、106.18±18.72、209.28±44.41,差异有统计学意义(F=19.037,P0.05),高剂量组小鼠卵巢细胞ROS水平显著增高;7对照组、低剂量组及高剂量组小鼠卵巢组织NO活性分别为(23.63±0.69)μmol/gpro、(23.04±1.14)μmol/gpro、(12.04±0.65)μmol/gpro,差异有统计学意义(F=348.731,P0.05),高剂量组小鼠卵巢组织NO活性明显降低。8对照组、低剂量组及高剂量组小鼠卵巢组织NOS活性分别为(0.0050±0.0003)U/mgpro、(0.0039±0.0004)U/mgpro、(0.0014±0.0014)U/mgpro,差异有统计学意义(F=22.739,P0.05),高剂量组小鼠卵巢组织NOS活性明显降低。9对照组、低剂量组及高剂量组小鼠卵巢组织8-OHdG蛋白表达的平均光密度值分别为0.0099±0.0004、0.0389±0.0016、0.0763±0.0131,差异有统计学意义(F=76.214,P0.05),高剂量组8-OHdG蛋白表达水平增高。10对照组、低剂量组及高剂量组小鼠卵巢细胞凋亡率分别为5.6%、22.00%、44.00%,差异有统计学意义(c~2=817.267,P0.05),高剂量组小鼠卵巢细胞凋亡率明显增加。结论 1壬基酚染毒导致小鼠的体重增加、卵巢湿重及卵巢系数下降。2壬基酚染毒导致小鼠血清E_2、P及FSH水平下降。3壬基酚染毒导致小鼠的总卵泡、初级卵泡、成熟卵泡数目减少,闭锁卵泡数目增多,高剂量的壬基酚作用更明显。4壬基酚染毒导致小鼠卵巢组织NO、NOS活性均下降,ROS水平、8-OHdG蛋白表达水平均增高,引起卵巢细胞凋亡,高剂量的壬基酚作用更明显。图5幅;表8个;参135篇。
【图文】：
(a)：对照组 (b)：低剂量组 (c)：高剂量组图 1 三组卵巢组织病理形态学结果（HE×40）Fig.1 Pathological morphological results of three groups of ovarian tissue（HE×40）
(a)：对照组 (b)：低剂量组 (c)：高剂量组图 2 三组卵巢组织病理形态学结果（HE×200）Fig.2 Pathological morphological results of three groups of ovarian tissue（HE×200）高剂量组小鼠卵巢 HE 染色，初级卵泡及成熟卵泡的数目明显减少，闭锁卵泡数目增多，可见初级卵母细胞明显萎缩，卵巢颗粒细胞松散，卵母细胞核固缩，卵
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R114
【参考文献】
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