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孕哺期壬基酚暴露诱导大鼠子代海马小胶质细胞过量释放一氧化氮和前列腺素E2的机制研究

发布时间:2020-06-24 11:58
【摘要】:目的:壬基酚(Nonylphenol,NP),是持久性有机污染物(persistent organic pollutants,POPs)的重要成员之一,具有神经毒性。胎儿和儿童的中枢神经系统(central nervous system,CNS)对POPs具有高度敏感性。小胶质细胞(Microglia,MG)是CNS中重要的固有免疫细胞,可以抵抗外源化学物的入侵。然而,这使得MG成为NP神经毒性作用潜在的靶细胞。MG异常激活时,可过量产生一氧化氮(nitric oxide,NO)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2),造成神经系统的损伤。因此,本研究拟探究孕哺期母体NP暴露是否能够激活子代海马中的MG产生过量的NO和PGE2及其可能机制。实验方法:1.体内实验:按染毒剂量将怀孕大鼠随机分成四组:0 mg/kg/day、10 mg/kg/day、50 mg/kg/day和100 mg/kg/day组,对孕鼠进行相应浓度的NP灌胃。于产后第7及21天取仔鼠海马进行试验。使用总一氧化氮试剂盒测定仔鼠海马中NO含量。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定仔鼠海马中PGE2含量。免疫荧光观察仔鼠海马MG激活情况。Western blot与免疫荧光实验检测TLR4/My D88/NF-κB信号通路与氧化应激相关蛋白表达变化。2.体外实验:建立BV2小胶质细胞系NP暴露模型,并使用TLR4特异性拮抗剂预处理BV2 MG细胞。使用总一氧化氮试剂盒测定培养上清中NO含量。ELISA测定培养上清中PGE2含量。Western blot检测TLR4蛋白表达变化。结果:1.孕哺期NP暴露激活子代海马中的MG。在产后(postnatal day,PND)第7天与PND21,NP处理组仔鼠海马MG激活数量明显增多,MG激活标志物Iba1荧光强度增加,差异具有统计学意义(P0.05)。2.孕哺期NP暴露导致子代海马NO分泌升高。在PND7与PND21,NP处理组中仔鼠海马NO表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);在PND7与PND21,NP处理组中仔鼠海马中i NOS蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05),免疫荧光显示MG中i NOS表达增加。3.孕哺期NP暴露导致子代海马PGE2分泌升高。在PND7与PND21,NP处理组中仔鼠海马中PGE2表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);在PND7与PND21,NP处理组中仔鼠海马中COX-2蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)免疫荧光显示MG中COX-2表达增加。4.孕哺期NP暴露可激活子代海马中TLR4/My D88/NF-κB信号通路。在PND7与PND21,NP处理组中仔鼠海马中TLR4蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);在PND7与PND21,NP处理组中仔鼠海马中My D88和TRAF6蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);在PND7和PND21,孕哺期NP暴露引起仔鼠海马中p65发生核转移;在PND7和PND21,NP处理组中仔鼠海马中p-p65蛋白含量明显升高,差异具有统计学意义(P0.05),而p65蛋白表达无明显变化。5.TLR4拮抗剂减少NP诱导BV2小胶质细胞产生的NO和PGE2。50μM NP能引起BV2小胶质细胞分泌的NO、PGE2表达明显升高,结果具有统计学意义(P0.05),抑制剂预处理的BV2细胞NO、PGE2表达水平明显低于NP处理组,结果具有统计学意义(P0.05)。6.孕哺期NP暴露引起子代海马中氧化应激产生。在PND21,孕哺期NP暴露引起仔鼠海马中4-HNE表达升高。而在PND7,4-HNE表达无明显变化;在PND21,NP处理组中仔鼠海马中Nrf2和HO-1蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05),而在PND7,Nrf2和HO-1蛋白表达无明显变化。结论:孕哺期母体NP暴露激活子代海马中的MG,使其产生过量的NO和PGE2;而TLR4/My D88/NF-κB信号通路和Nrf2信号通路可能参与调节MG的激活与NO、PGE2的过量产生。
【学位授予单位】:中国医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R114
【图文】:

子代,海马,免疫荧光,标尺


10图 3.1.1 孕期及哺乳期 NP 暴露激活 PND7 子代海马 MG(×2图 3.1.1 中,标尺为 50μm,并适用于其他免疫荧光图;A 是 Iba1 的表达;B 是 Iba1 阳性细胞数统计;C 是 Iba1 的荧光强度测定。Iba1 可作为 MG据以 mean ±SEM 表示(n=6);*表示与 0 mg/kg 组相比,P < 0.05;#表示比,P < 0.05;&表示与 50 mg/kg 组相比,P < 0.05

子代,海马,统计学意义


2孕期及哺乳期NP暴露激活PND21子代海马MG(×200)

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本文编号:2727834


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