人血管内皮细胞氚水暴露后差异表达基因的筛选及毒性效应研究

发布时间：2020-06-29 13:38

【摘要】：目的:探讨氚水染毒后,染毒组与对照组相比差异基因的表达情况。观察细胞形态、大小、增殖和衰老改变,并估算出氚水所致细胞吸收剂量,为氚水内照射对血管内皮细胞可能造成的损伤提供理论依据。方法:1.用3.7?103 Bq/ml氚水处理HUVEC细胞48h后,收集染毒组与对照组RNA,采用基因芯片技术分析染毒组与对照组间差异表达的基因。运用GO和Pathway分析对差异基因功能以及可能参与的信号通路进行限定和描述。通过String 10.5在线分析工具对差异基因相互作用关系进行预测,筛选出中心节点基因。2.HUVEC细胞用3.7?103 Bq/ml氚水连续染毒15代,分别收集未染毒细胞、染毒的第3、6、9、12、15代细胞,记作T0、T3、T6、T9、T12、T15。3.在普通光学显微镜下观察氚水染毒后,细胞生长24h、48h、72h的形态并拍照记录,使用Image J软件对细胞表面积大小进行测量。4.采用CCK-8细胞增殖与毒性实验检测氚水染毒后HUVEC细胞生长24h、48h、72h增殖活性的改变情况。5.采用β-半乳糖苷酶染色试剂盒,检测氚水染毒后HUVEC细胞衰老的情况。6.采用COOLER算法,通过代码PARTRAC估算径向距离,对液态水电子径迹进行蒙特卡洛模拟,估算氚水所致细胞吸收剂量大小。结果:1.氚水染毒后,CTH、CCNE1、BAX、CASP8、RB1基因表达显著上调,RPS27A、KISS1基因表达显著下调。2.氚水染毒后,随染毒时间增加,HUVEC细胞形态发生改变,胞浆颗粒物增加,边界模糊,细胞表面积有所增加,T3、T6代细胞中观察到细胞衰老现象;T6、T9、T12、T15代细胞的增殖活性受到抑制。随染毒时间增加,氚水所致细胞吸收剂量增加。结论:1.CTH、CCNE1、BAX、CASP8、RB1、RPS27A、KISS1基因可能参与氚水对血管内皮细胞的内照射损伤过程。2.氚水对HUVEC细胞具有细胞毒性,随着染毒代数增加,对细胞的增殖活性抑制越明显。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R14
【图文】：

.03、1.99、1.96，所有值均介于 1.8-2.1 之间，说明对照组与实；（2）实验组与对照组标准变性凝胶电泳实验结果，如图 1.照组样品电泳条带清晰，28S:18S rRNA 条带亮度大于或接近 良好无降解。以上结果均说明提取的实验组与对照组 RNA 样片实验要求。表 1.1 RNA 样品纯度与浓度测定分析结果Sample ID OD260/280 OD260/230 浓度（ng/μl）1 2.03 2.11 1125.422 2.05 1.98 790.023 2.06 1.82 602.924 2.03 1.93 1522.745 1.99 2.23 794.356 1.96 2.24 776.84

14图 1.2 基因芯片扫描结果图1.3 氚水染毒实验组与对照组间差异表达的 LncRNA（火山图）图 1.4 氚水染毒实验组与对照组间差异表达的 mRNA（火山图）的数据点代表实验组与对照组相比显著上调的基因。LncRNA 分析结果表明，实验组与对照组相比，有 1717 个基因显著上调，3994 个基因显著下调（fold change > 2，P < 0.05）。mRNA 分析结果显示，实验组与对照组相比，有 4562 个基因显著上调，1433 个基因显著下调（fold change > 2，P < 0.05）。图 1.5、图 1.6 分别是 LncRNA与 mRNA 聚类分析热图结果。后续实验中将对差异 mRNAs 进行详细分析?

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本文编号：2733932