干酪乳杆菌对丙烯酰胺暴露大鼠肠黏膜屏障功能和肠道菌群的影响

发布时间：2020-07-27 08:03

【摘要】：目的探讨不同剂量丙烯酰胺暴露对大鼠肠道损伤的程度,以及干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)对丙烯酰胺暴露大鼠肠黏膜屏障功能和肠道菌群的保护效果。方法1.动物分组:105只雄性Wistar大鼠适应性喂养1周后,按体质量随机分为7组(正常对照组、低剂量丙烯酰胺组、中剂量丙烯酰胺组、高剂量丙烯酰胺组、干酪乳杆菌干预低剂量丙烯酰胺组、干酪乳杆菌干预中剂量丙烯酰胺组和干酪乳杆菌干预高剂量丙烯酰胺组),每组15只,每天保证足够的基础饲料及饮水。按以下方法给药:正常对照组,给予生理盐水灌胃;低、中、高剂量丙烯酰胺组分别给予5、15、30mg/(kg·bw·d)丙烯酰胺灌胃;干酪乳杆菌干预低、中、高剂量丙烯酰胺组先给予2.1x10~9 CFU/(kg·bw·d)干酪乳杆菌灌胃,1 h后分别给予5、15、30 mg/(kg·bw·d)丙烯酰胺灌胃。实验周期为4周。最后一次灌胃后,用清洁笼无菌收集各组大鼠粪便。禁食12 h后,60 mg/kg戊巴比妥钠溶液麻醉,于腹主动脉处取血,分离血浆,留取小肠组织,在距离回盲瓣5 cm处的小肠组织进行固定和冻存,用于后续肠组织透射电镜观察和蛋白检测。2.透射电镜观察大鼠小肠组织超微结构的改变。3.采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血浆中D-乳酸(d-lactic acid,D-LA)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)和肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid-binding protein,iFABP)的水平变化。4.蛋白质印迹法(Western blot)检测各组大鼠小肠组织紧密连接蛋白ZO-1和occludin蛋白表达水平。5.采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠粪便中大肠杆菌(Escherichia coli)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)及柔嫩梭菌(Clostridium leptum)的含量。结果1.透射电镜结果显示,正常对照组大鼠小肠微绒毛排列整齐、丰富;与正常对照组相比,低剂量丙烯酰胺组大鼠小肠微绒毛无明显变化,中、高剂量丙烯酰胺组大鼠小肠微绒毛排列稀疏、脱落,微绒毛长度分别缩短了17.6%和36.2%,具有显著性差异(P0.05);干酪乳杆菌干预低、中、高剂量丙烯酰胺组大鼠小肠微绒毛排列情况均得到不同程度的改善,微绒毛长度分别增长了42.9%、50.0%和29.8%,具有显著性差异(P0.05)。2.与正常对照组相比,低剂量丙烯酰胺组大鼠血浆中D-LA、DAO和iFABP水平均无明显变化,中、高剂量丙烯酰胺组大鼠血浆中D-LA、DAO和iFABP水平明显升高(P0.05);干酪乳杆菌干预中、高剂量丙烯酰胺组大鼠血浆中D-LA、DAO和iFABP水平显著降低(P0.05)。3.与正常对照组相比,低、中、高剂量丙烯酰胺组大鼠小肠紧密连接蛋白ZO-1表达水平显著降低(P0.05),中、高剂量丙烯酰胺组大鼠小肠紧密连接蛋白occludin表达水平显著降低(P0.05);而干酪乳杆菌干预低、中剂量丙烯酰胺组大鼠小肠紧密连接蛋白ZO-1表达水平显著升高(P0.05),干酪乳杆菌干预中、高剂量丙烯酰胺组大鼠小肠紧密连接蛋白occludin表达水平显著升高(P0.05)。4.与正常对照组相比,中、高剂量丙烯酰胺组大鼠粪便中大肠杆菌和粪肠球菌的数量明显升高(P0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌的数量明显降低(P0.05),脆弱拟杆菌和柔嫩梭菌的数量无明显变化(P0.05);而干酪乳杆菌干预组大鼠粪便中大肠杆菌和粪肠球菌的数量均有不同程度的减少,双歧杆菌和乳酸杆菌的数量均有不同程度的增加,脆弱拟杆菌和柔嫩梭菌的数量无明显变化(P0.05)。结论1.低剂量的丙烯酰胺对大鼠的肠道损伤程度较轻,而中、高剂量的丙烯酰胺则会造成大鼠肠黏膜屏障功能的破坏和肠道菌群的失衡,并且随着剂量的增加,所造成的损伤越严重。2.干酪乳杆菌对丙烯酰胺所诱导的肠道损伤具有一定程度的保护效果,其机制可能与改善肠黏膜屏障功能,调节肠道菌群有关。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R151
【图文】：

透射电镜,丙烯酰胺,干酪乳杆菌,低剂量

结果结果干酪乳杆菌对丙烯酰胺暴露大鼠小肠组织超微结构的影响透射电镜结果显示，正常对照组大鼠小肠微绒毛排列整齐、丰富；与正常相比，低剂量丙烯酰胺组大鼠小肠微绒毛无明显变化，中、高剂量丙烯酰胺小肠微绒毛排列稀疏、脱落，微绒毛长度分别缩短了 17.6%和 36.2%，具有差异（P＜0.05）；干酪乳杆菌干预低、中、高剂量丙烯酰胺组大鼠小肠微绒情况均得到不同程度的改善，微绒毛长度分别增长了 42.9%、50.0%和 29.8%显著性差异（P＜0.05）。（图 1 和表 1）

扩增曲线,干酪乳杆菌,小肠,丙烯酰胺

2 干酪乳杆菌对大鼠小肠紧密连接蛋白 ZO-1 和 occludin 的影响；(B)低剂量丙烯酰胺组；(C)中剂量丙烯酰胺组；(D)高剂量丙烯酰胺剂量丙烯酰胺组；(F)干酪乳杆菌干预中剂量丙烯酰胺组；(G)干酪乳组照组相比，P＜0.05；b与低剂量丙烯酰胺组相比，P＜0.05；c与中剂量05；d与高剂量丙烯酰胺组相比，P＜0.05。菌对丙烯酰胺暴露大鼠肠道菌群的影响株扩增曲线标准品分别进行稀释，稀释的浓度梯度为 10 倍，反应得到各图 3），结果显示，各菌株的荧光强度随着 DNA 拷贝数的增加程度时，荧光强度不会继续增加，进入平台期，因此，在达和 DNA 拷贝数的线性关系是后续对待测样本进行定量计算

干酪乳杆菌,丙烯酰胺,菌群,低剂量

17图 6 干酪乳杆菌对大鼠肠道菌群的影响正常对照组；(B)低剂量丙烯酰胺组；(C)中剂量丙烯酰胺组；(D)高剂量丙烯酰胺组；(E)干杆菌干预低剂量丙烯酰胺组；(F)干酪乳杆菌干预中剂量丙烯酰胺组；(G)干酪乳杆菌干预量丙烯酰胺组a与正常对照组相比，P＜0.05；b与低剂量丙烯酰胺组相比，P＜0.05；c与中剂量丙烯酰胺比，P＜0.05；d与高剂量丙烯酰胺组相比，P＜0.05。

【参考文献】