1-溴丙烷诱导的周围神经毒性及其机制研究

发布时间：2020-08-12 22:08

【摘要】：1-溴丙烷(1-Bromopropane,1-BP)是常用的工业有机溶剂,近年来被广泛用作臭氧层消耗物质(Ozone depleting substance,ODS)的替代剂及干洗剂。我国是1-BP主要生产和出口国,随着《蒙特利尔议定书》的执行,国内应用也逐年增加,目前我国1-BP职业接触人群呈快速上升趋势。1-BP具有神经毒性,除来自美国和日本的中毒病例外,近年我国1-BP中毒病例逐渐见诸报道,2013年溴丙烷中毒纳入了我国新版《职业病分类和目录》。目前报道的1-BP中毒病例均是因严重周围神经损伤住院治疗的病人,这些病人多表现为站立、行走困难、甚至瘫痪。迄今,1-BP周围神经毒性机制不清楚,无特效治疗药物,神经损伤很难完全恢复。一般认为神经毒性有机溶剂多直接损伤神经轴突,但基于1-BP中毒病人的症状、体征、预后及腓肠神经活检推测1-BP可能导致了神经元损伤,而非仅仅轴索毒性。有研究观察到1-BP可导致大鼠小脑颗粒细胞、浦肯野细胞变性死亡,伴随小脑星型胶质细胞、小胶质细胞激活及氧化应激。我们先前也观察到1-BP可导致大鼠前额叶和海马区域神经炎症,伴随神经元丢失和认知功能障碍,但1-BP染毒是否导致运动皮质神经元损伤,并与1-BP周围神经毒性相关,迄今尚未见报道。研究显示,1-BP进入体内代谢复杂,主要经肝脏细胞色素P4502E1(Cytochrome P4502E1,CYP2E1)代谢并产生多种氧化代谢产物,但这些活性代谢产物极性强,难以经受长距离的运输和透过血脑屏障到达脑内。作为有机溶剂,1-BP本身极易进入大脑,1-BP的神经毒性是否因脑内1-BP在大脑原位经CYP2E1代谢产生活性代谢产物所致?因此,本课题分别采用临床上能够清除大脑自由基的依达拉奉(Edaravone,EDV)和CYP2E1特异性抑制剂烯丙基硫(Allyl sulfide),通过抗氧化和抑制1-BP经CYP2E1氧化代谢,观察是否能够抑制或减轻1-BP的周围神经毒性,改善其神经功能。并探讨了 1-BP导致周围神经毒性的早期事件、关键调控分子和传播机制,以期发现有效干预和治疗的针对性靶点,为接触人群保护措施的制定和完善提供可靠数据;同时也为其它有机溶剂的神经毒性研究提供可借鉴的思路和依据。第一部分自由基清除剂依达拉奉对1-溴丙烷诱导大鼠周围神经毒性的影响研究目的1-BP能够引起大脑氧化损伤,EDV是一种强效的自由基清除剂,临床上应用于治疗脑缺血性卒中(Cerebral ischemic stroke,CIS)和脑缺血再灌注引起的氧化损伤。实验室研究也观察到EDV对肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS)、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和帕金森病(Parkinson's disease,PD)等多种慢性神经退行性病变动物模型有明显的改善作用,与抑制自由基引起的氧化损伤,减轻下游神经炎症和神经元丢失密切相关。因此,本研究采用EDV作为抗氧化剂,观察了 EDV对1-BP诱导周围神经损伤的影响,以探讨1-BP的氧化损伤机制在其周围神经毒性中的作用。研究方法1.1动物分组及处理:72只SPF级雄性成年Wistar大鼠,体重180-220 g,适应性喂养7天后,随机分为6组:空白对照组、200 mg/kg.bw 1-BP组、400 mg/kg.bw 1-BP组、800 mg/kg.bw 1-BP组、800 mg/kg.bw 1-BP+EDV干预组及EDV对照组,每组12只。经腹腔注射给予6 mg/kg.bw的EDV,4小时后,1-BP分别按照不同剂量灌胃染毒,每天一次,每周7天,连续6周。每周检测各组大鼠后肢抓力评价周围神经损伤。1.2各组大鼠大脑运动皮质形态学观察:大鼠经体内灌注固定后,取大脑。分别经后固定和蔗糖脱水后,制备冠状冰冻切片,采用硫堇染色观察运动皮质尼氏体密度评价神经元损伤情况;采用免疫组织化学染色,观察各组大鼠运动皮质神经元损伤及数量变化,观察小胶质细胞及星型胶质细胞的激活情况,采用免疫双荧光染色检测神经元凋亡情况。1.3大脑生化指标检测:采用生化检测试剂盒检测各组大鼠大脑运动皮质一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量及一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)活性,反应大脑氮化应激状态。1.4 Western blot检测大鼠大脑运动皮质相关蛋白表达:采用Western blot分别检测了神经元特异性核蛋白(Neuron specific nuclear protein,NeuN)、小胶质细胞标志蛋白-离子钙接头蛋白分子1(Ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba-1)、星形胶质细胞标志蛋白-胶质细胞原纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、硫氧还蛋白 1(Thioredoxin 1,Trx1)、凋亡信号调节激酶 1(Apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)及磷酸化ASK1(Thr 845)、p38及磷酸化p38、3-硝基酪氨酸(3-Nitrotyrosine,3-NT)的相对蛋白表达量,观察评价胶质细胞激活、神经元凋亡及相关凋亡信号传导通路激活情况。结果1.1实验期间,各组动物体重均逐渐增加,各组体重差异无统计学意义(p0.05)。自染毒第4周起,各剂量1-BP染毒组可观察到大鼠后肢抓力降低,呈剂量依赖性,EDV干预明显改善1-BP导致的大鼠后肢抓力下降。1.2硫堇染色显示,随着1-BP染毒剂量增加,大鼠大脑运动皮质尼式体着色逐渐变浅,表明神经元损伤加重。EDV干预减轻了 1-BP导致的大鼠大脑运动皮质尼式体密度降低,改善了 1-BP导致的神经元损伤。1.3免疫组织化学染色显示,1-BP染毒组可观察到大鼠大脑运动皮质区NeuN染色阳性细胞数减少,Iba-1染色阳性细胞所占面积和GFAP染色阳性细胞所占面积增加,均呈剂量依赖性。EDV干预能够明显逆转1-BP导致的大鼠大脑运动皮质神经元丢失、小胶质及星形胶质细胞激活。采用western blot检测的大鼠大脑运动皮NeuN、Iba-1、GFAP蛋白表达水平变化与形态学结果一致。1.4免疫双荧光染色检测结果显示,NeuN染色阳性细胞可观察到凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3的共定位表达,提示神经元发生凋亡。EDV干预可明显减少1-BP导致的大鼠大脑运动皮质Cleaved Caspase-3在NeuN染色阳性细胞上的表达。western blot检测大鼠大脑运动皮质区Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平变化与形态学变化一致。1.5免疫双荧光染色检测大鼠大脑运动皮质区NeuN和GFAP表达,结果显示1-BP导致大脑运动皮质NeuN染色阳性细胞减少,其周围GFAP染色阳性细胞增加,胞体增大、分支增多,高剂量1-BP染毒组可见胶质瘢痕。EDV干预明显改善了1-BP导致的大鼠大脑运动皮质神经元丢失及星形胶质细胞激活。1.6 1-BP染毒可导致大鼠大脑运动皮质Trx 1蛋白表达水平降低,呈剂量依赖性;p-ASK1(Thr 845)、p-p38及蛋白硝基化产物3-NT表达水平则呈现剂量依赖性增加,表明1-BP染毒激活了 Trx1-ASK1-p38 MAPK凋亡信号传导通路。EDV干预逆转了 1-BP导致的Trx 1表达降低,降低了 p-ASK1(Thr 845)、p-p38及3-NT表达的增加,抑制了 1-BP导致的Trx1-ASK1-p38 MAPK凋亡信号传导通路激活。1.7 1-BP染毒导致大鼠大脑运动皮质NO水平和NOS活性升高,均呈剂量依赖性。EDV干预能够明显改善1-BP引起的大脑氮化应激状态。结论1.1 1-BP经口染毒6周可导致大鼠后肢抓力下降,自由基清除剂EDV可明显减轻1-BP的周围神经毒性,改善周围神经功能。1.2 1-BP染毒可导致大鼠大脑运动皮质小胶质细胞和星形胶质细胞过度激活、神经元凋亡,EDV可明显纠正1-BP导致的大鼠大脑神经炎症及神经元丢失。1.3 1-BP染毒可导致大脑运动皮质氧化/氮化应激,激活Trx1-ASK1-p38 MAPK凋亡信号传导通路,EDV干预可抑制1-BP对Trx1-ASK1-p38 MAPK通路的激活作用,减轻大脑氧化/氮化损伤。第二部分CYP2E1抑制剂烯丙基硫对1-溴丙烷诱导大鼠周围神经毒性的影响研究目的代谢活化是多种化学物诱导神经毒性的首发事件。1-BP体内代谢过程复杂,CYP2E1是1-BP主要代谢酶。1-BP的C2经肝脏CYP2E1氧化可生成活性代谢产物1-溴-2-丙醇(1-Bromo-2-propanol)和溴丙酮(3-Bromoacetone),为1-BP最主要且具有毒理学意义的代谢途径。肝脏是人体主要代谢器官,而经肝脏代谢的极性活性产物难以经受长距离的运输和透过血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)。生理状态下,大脑CYP2E1表达较低,研究显示大脑CYP2E1可受外源化学物诱导。作为有机溶剂,1-BP本身极易进入大脑,进入脑内的1-BP是否能够诱导大脑CYP2E1表达?1-BP经CYP2E1在脑内原位的活化代谢是否是启动其神经毒性的早期事件?本实验在1-BP染毒同时给予CYP2E1的特异性抑制剂抑制CYP2E1活性,观察了对1-BP诱导周围神经损伤的影响,以及脑内CYP2E1表达水平的改变,并分析了血液和大脑内活性代谢产物的变化,以探讨脑内1-BP经原位氧化代谢在其周围神经毒性中的作用。研究方法2.1动物分组及处理:48只SPF级雄性成年Wistar大鼠,体重180-220 g,适应性喂养7天后,随机分为4组:空白对照组、1-BP染毒组、1-BP+烯丙基硫干预组及烯丙基硫对照组,每组12只。经口给予烯丙基硫(100 mg/kg.bw),4小时后,1-BP(800 mg/kg.bw)经口染毒。每天一次,每周7天,直到1-BP染毒组大鼠出现瘫痪,共计9周。每周检测各组大鼠后肢抓力,观测大鼠步态情况、并进行评分,实验末期密切观察各组大鼠后肢瘫痪情况。2.2各组大鼠大脑运动皮质形态学观察:大鼠体内灌注固定,经后固定和脱水,制备冠状冰冻切片,采用硫堇染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)染色,观察运动皮质神经元损伤及凋亡;采用免疫组织化学染色,观察运动皮质神经元丢失及胶质细胞激活;采用免疫双荧光染色检测小胶质细胞中CYP2E1的表达及M1/M2极化情况,并检测神经元氧化损伤及凋亡相关蛋白的表达。2.3大脑生化指标检测:采用生化试剂盒检测各组大鼠大脑运动皮质丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量及还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量。2.4 Western blot检测大鼠大脑运动皮质相关蛋白表达:采用western blot检测各组大鼠大脑运动皮质 NeuN、Iba-1、GFAP、Cleaved Caspase-3、CYP2E1、iNOS、精氨酸酶(Arginase-1,Arg-1)、核转录因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)及 p-NF-KB、Trx 1、ASK1 及 p-ASK1(Thr 845)、p38及 p-p38 的相对蛋白表达量,以评价神经元丢失、胶质细胞活化、小胶质细胞极化及凋亡信号传导通路激活情况。2.5 qRT-PCR检测各组大鼠大脑运动皮质小胶质细胞极化标志物表达:提取大鼠大脑运动皮层组织RNA,逆转为cDNA后,分别采用iNOS、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、Arg-1、IL-10、IL-4、转化生长因子 β1(Transforming growth factor β1,Tgfb1)特异引物经PCR扩增,检测各因子的mRNA表达量。2.6 1-BP染毒大脑中1-溴-2-丙醇含量测定:24只SPF级雄性成年Wistar大鼠,体重180-220 g,适应性喂养7天后,随机分为空白对照组、1-BP染毒组、1-BP+烯丙基硫干预组及烯丙基硫对照组,每组6只。1-BP染毒前4小时,经口给予烯丙基硫,剂量为100 mg/kg.bw。1-BP(800 mg/kg.bw)经口染毒。每天一次。染毒5天后,经颈静脉取血后,处死动物,取动物大脑。采用动态顶空-气相色谱-串联质谱联用法(Dynamic headspace-gas chromatography-tandem mass spectrometry,GC-MS)定性定量检测各组大鼠血液和脑组织中 1-BP经CYP2E1代谢的活性产物1-溴-2-丙醇含量。结果2.1 1-BP经口染毒导致大鼠体重增长减慢,自染毒第5周起,与空白对照组相比,差异有统计学意义(p0.01)。抑制CYP2E1活性可明显改善1-BP染毒导致的大鼠体重减轻。2.2硫堇、免疫组织化学染色显示,1-BP染毒可导致大鼠大脑运动皮质神经元损伤及数量减少。TUNEL染色及免疫双荧光染色证实,1-BP染毒动物大脑皮质神经元凋亡。烯丙基硫抑制CYP2E1活性能够逆转1-BP导致的大鼠大脑运动皮质神经元损伤及凋亡。Western blot检测大鼠大脑运动皮层的NeuN及Cleaved Caspase-3蛋白表达水平变化趋势与形态学结果一致。2.3 1-BP染毒导致大鼠后肢抓力下降,步态评分增加,染毒结束时(9周末)30%大鼠后肢瘫痪。烯丙基硫干预改善了 1-BP导致的大鼠后肢抓力下降及步态异常,1-BP导致的后肢瘫痪率下降20%。2.4免疫组织化学染色显示,1-BP染毒导致大鼠大脑运动皮质小胶质细胞和星形胶质细胞激活。烯丙基硫干预明显减轻了 1-BP导致的胶质细胞激活。Western blot检测显示,大鼠大脑运动皮质Iba-1及GFAP蛋白表达水平变化趋势与形态学结果一致。2.5免疫双荧光染色显示,1-BP染毒导致激活的小胶质细胞中CYP2E1表达增加,并被烯丙基硫抑制。Western blot证实,烯丙基硫能够抑制1-BP染毒导致的运动皮质CYP2E1蛋白表达水平增加。2.6免疫双荧光染色显示,1-BP染毒导致小胶质细胞M1型极化增加,M2型极化减少,烯丙基硫干预能够纠正1-BP导致的小胶质细胞M1/M2极化失衡。Western blot及qRT-PCR结果证实,烯丙基硫抑制1-BP引起的M1极化标志iNOS蛋白表达的增加,并降低iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平的升高;改善M2极化标志Arg-1蛋白表达的减少,以及Arg-1 mRNA表达的降低。2.7 Western blot检测证实,1-BP导致大鼠大脑运动皮质NF-κB通路及Trx-ASK1-p38 MAPK凋亡信号传导通路激活,此作用可被烯丙基硫抑制。2.8 1-BP染毒导致大鼠大脑运动皮质MDA水平增加,GSH活性降低,并在NeuN荧光染色阳性细胞上观察到大量4-HNE的共定位表达。烯丙基硫可抑制1-BP染毒导致的大鼠大脑运动皮质MDA水平增加、GSH活性降低,并降低神经元中4-HNE氧化修饰蛋白水平。2.9 GC-MS检测显示,1-BP可升高染毒大鼠血液和大脑中1-BP氧化代谢活性产物1-溴-2-丙醇含量,烯丙基硫能够明显降低检测组织中1-溴-2-丙醇含量。结论2.1 800 mg/kg.bw 1-BP经口连续染毒,导致染毒大鼠后肢抓力进行性下降,步态异常,染毒9周末出现后肢瘫痪。2.2 1-BP染毒可诱导运动皮质小胶质细胞中CYP2E1表达,导致小胶质细胞M1/M2极化失衡,并激活星形胶质细胞,引发脑内氧化/氮化应激及炎症级联反应,最终导致运动神经元凋亡。2.3 1-BP染毒可升高1-BP染毒大鼠大脑和血液中活性氧化代谢产物1-溴-2-丙醇含量。2.4烯丙基硫能明显抑制1-BP诱导的大鼠大脑和小胶质细胞中CYP2E1表达,降低1-溴-2-丙醇含量,纠正小胶质细胞M1/M2极化失衡和神经元损伤,有效减轻1-BP的周围神经毒性。第三部分小胶质细胞释放外泌体在1-溴丙烷诱导神经元损伤中的作用研究目的近年来外泌体介导的小胶质细胞-神经元通讯被认为与神经毒性在脑内进展性发展密切相关。研究表明,脑内的一些毒性蛋白如α-突触核蛋白寡聚体、淀粉样蛋白-β(Amyloid-β,Aβ)可借助外泌体的分泌实现在细胞间的传递,导致慢性神经退行性疾病的发展。基于以上研究,本研究分别采用1-BP和烯丙基硫作用于体外培养的BV-2小胶质细胞,观察BV-2细胞的M1/M2极化情况,及BV-2细胞中CYP2E1的表达情况。其后,采用1-BP的活性代谢产物1-溴-2-丙醇作用于体外培养的BV-2小胶质细胞,收集分泌的炎性外泌体,标记后加入原代新生大鼠大脑皮层神经元培养体系中,观察神经元对标记外泌体的摄取情况,探讨1-BP神经毒性的传播机制。研究方法3.1 BV-2小胶质细胞M1/M2极化及CYP2E1的表达:将体外培养的BV-2小胶质细胞,分别设置为空白对照组、1-BP、1-BP+烯丙基硫、烯丙基硫及LPS阳性对照组,分别将1-BP、烯丙基硫和LPS加入培养体系,制备细胞爬片。作用24小时后,采用免疫双荧光检测各组BV-2细胞的M1/M2极化情况,及BV-2细胞中CYP2E1的表达情况。3.2 1-溴-2-丙醇激活BV-2小胶质细胞外泌体的收集:将体外培养的BV-2小胶质细胞设置为空白对照组和1-溴-2-丙醇处理组。将终浓度为1 mM的1-溴-2-丙醇加入培养体系。染毒24小时,更换含有100 μMATP的无血清培养液,37℃孵育30分钟。PBS清洗细胞2次,加入无血清培养基继续培养48小时。收集培养液,转移到离心管中。梯度离心收集外泌体。3.3炎性外泌体鉴定:采用western blot检测外泌体阳性标志蛋白ALIX、Flotillin-2表达,并检测外泌体中炎性因子IL-1β表达。采用日立HT-7700型透射电子显微镜观察外泌体形态。3.4外泌体标记:采用细胞膜红色亲脂荧光探针DiI对分离的外泌体进行标记示踪。将以上收集外泌体重悬于无菌PBS中后与适量DiI共同孵育10分钟,采用无菌PBS清洗外泌体三次,去除游离DiI染料和杂质。3.5神经元对外泌体的摄取:分别将空白对照组和1-溴-2-丙醇处理组提取的DiI标记外泌体(2 μg/mL)加入原代神经元培养液中,采用无血清培养基共同孵育24小时,PBS洗涤3次,采用MAP-2标记神经元观察其形态变化,以及神经元摄取外泌体情况。结果3.1免疫双荧光染色显示,1-BP染毒导致BV-2小胶质细胞活化,并诱导CYP2E1表达增加,M1/M2极化失衡。烯丙基硫干预可有效抑制1-BP诱导BV-2细胞CYP2E1的表达,纠正其M1/M2极化失衡。3.2 1-溴-2-丙醇染毒导致BV-2小胶质细胞激活,免疫荧光染色结果表明,1-溴-2-丙醇增强BV-2小胶质细胞M1极化、减弱M2极化。3.3 Western blot检测来自激活BV-2小胶质细胞的外泌体,与空白对照组相比,1-溴-2-丙醇处理组细胞中外泌体阳性标志蛋白ALIX、Flotillin-2表达增加,IL-1β表达也明显升高。3.4免疫双荧光染色显示,在原代神经元培养体系中加入提取外泌体,神经元胞体和轴突中可观察到DiI标记的外泌体。同时观察到来自1-溴-2-丙醇染毒组的外泌体更易进入原代培养的神经元胞体中,并表现出对神经元的损伤作用,神经元轴突缩短或消失、胞体分解。结论3.1 1-BP染毒可导致体外培养BV-2小胶质细胞活化,CYP2E1表达增加;烯丙基硫能够明显抑制1-BP诱导的BV-2细胞中CYP2E1表达和M1/M2极化失衡。3.2 1-溴-2-丙醇染毒导致BV-2细胞M1极化,M1极化BV-2细胞来源的炎性外泌体更易进入原代培养的神经元胞体中,并表现出对神经元的损伤作用,神经元轴突缩短或消失、胞体分解。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R114
【图文】：

大脑,大鼠,硫堇,载玻片

向并修理平整后，将大鼠脑组织切成４０邋ｎｍ厚的连续冠状切片，储存于含０．０１％逡逑叠氮钠的ＰＢＳ中，放置４°Ｃ。根据Ｔｈｅ邋Ｒａｔ邋Ｂｒａｉｎ邋Ａｔｌａｓ中的大脑立体定位图谱逡逑［６２］（如图１－１）选择包含初级运动皮层（Ｐｒｉｍａｒｙ邋ｍｏｔｏｒ邋ｃｏｒｔｅｘ，邋Ｍｌ邋）和次级运逦．逡逑动皮层（Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ邋ｍｏｔｏｒ邋ｃｏｒｔｅｘ，Ｍ２）区域分别染色观察神经兀、小胶质细胞逡逑和星型胶质细胞形态变化。逡逑９—Ｌ—」ｒ￣邋二，遽１【与＇．：，沾］逡逑ｔｏａａｕｐｊ邋ｉｐ．７２逦｜邋ｊ邋｜逦｜．．．邋．邋｜逡逑图１－１．大鼠大脑立体定位图谱（引自Ｔｈｅ邋Ｒａｔ邋Ｂｒａｉｎ邋Ａｔｌａｓ）逡逑１．３．３．２脑切片硫堇染色逡逑从各组大鼠大脑冰冻切片中，挑选相同位置附近切片，ＰＢＳ漂洗一遍后，逡逑固定于正电荷防脱的载玻片上，３７°Ｃ千燥３０分钟。双蒸水漂洗载玻片后，将载逡逑玻片放入装有硫堇染色溶液的染色缸中染色２０分钟，显微镜下观察染色情况。逡逑３６逡逑

状态良好,剂量,大鼠,体重变化

Ｗｅｅｋｓ逡逑图１－２．各剂量１－ＢＰ染毒及ＥＤＶ干预对大鼠体重的影响逡逑１－ＢＰ染毒期间，各组大鼠一般状态良好。如图１－２所示，各组大鼠体重在前逡逑４周呈稳定增长趋势，其后各组体重变化基本保持稳定，各剂量１－ＢＰ染毒组大鼠逡逑与空白对照组相比，体重变化均无统计学意义。逡逑４３逡逑

抓力,后肢,大鼠

（与空白对照组相比，＞＜０．０５，＊＞：０．０１；与８００ｍｇ／ｋｇ．ｂｗｌ－ＢＰ组相比，＇＜０．０１）逡逑为了观察ＥＤＶ对１－ＢＰ所致周围神经毒性的保护作用，我们检测了各组大鼠逡逑的后肢抓力。图１－３为各组大鼠后肢抓力变化情况。实验前三周，各组大鼠后肢逡逑抓力差异无统计学意义，自染毒第四周起，２００邋ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ，４００邋ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ，８００逡逑ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ邋１－ＢＰ染毒导致大鼠后肢抓力不同程度减小，与空白对照组相比，差异逡逑有统计学意义（ｐ＜０．０１）。８００邋ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ邋１－ＢＰ染毒组大鼠后肢抓力下降最为严逡逑重，且染毒结束时损伤的后肢抓力并未恢复。预防性给予ＥＤＶ明显改善了邋１－ＢＰ逡逑染毒导致的大鼠后肢抓力下降（；？＜０．０１）。逡逑４４逡逑

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