DEHP和镉联合染毒对青春期雄性大鼠生殖功能的影响

发布时间：2020-08-26 19:42

【摘要】：目的本研究以邻苯二甲酸二乙基已基酯(Di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)和镉为受试物,研究DEHP和镉联合染毒对青春期雄性大鼠生殖功能的影响。方法1、采用3×3析因设计,将54只健康6周龄清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为9组,分别为溶剂对照(玉米油+蒸馏水)组,250mg/kg DEHP、1 000mg/kg DEHP、1mg/kg氯化镉、3mg/kg氯化镉、250mg/kg DEHP+1mg/kg氯化镉、250mg/kg DEHP+3mg/kg氯化镉、1 000mg/kg DEHP+1mg/kg氯化镉、1 000mg/kg DEHP+3mg/kg氯化镉染毒组,每组6只。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒4周,染毒容量为10ml/kg。2、末次染毒24h后,称重并摘除眼球收集血样,离心分离血清,采用ELISA法测定血清睾酮含量;大鼠处死后收集标本,采用CASA精子分析系统记录精子活力及密度;采用HE染色法分析睾丸组织细胞的数量及形态改变;TUNEL法检测睾丸细胞凋亡情况;采用紫外分光光度计法检测睾丸组织中MDA含量和T-SOD、GSH-Px活力的变化;提取睾丸组织总RNA,采用Real-Time PCR检测Akt、bcl-2、caspase-3、caspase-9的mRNA相对表达量。结果1、体重变化和脏器系数250mg/kg DEHP+1mg/kg氯化镉和1 000mg/kg DEHP+3mg/kg氯化镉染毒组大鼠的体重增量比对照组小(P0.05);联合染毒可导致大鼠肝脏系数增大(肝肿大),但DEHP和镉染毒对睾丸系数的影响没有统计学意义(P0.05)。2、精子活力及密度与对照组比较,1 000mg/kg DEHP+1mg/kg氯化镉和1 000mg/kg DEHP+3mg/kg氯化镉染毒组大鼠的精子密度和精子活力均较低(P0.05);析因分析结果显示DEHP和镉联合染毒对大鼠精子活力及密度无交互作用(P0.05)。3、睾丸组织病理形态DEHP和镉染毒可导致睾丸精曲小管萎缩,外壁边缘欠光滑,生精细胞层数减少且排列紊乱,部分组织溶解缺失形成空洞,管腔内成熟精子明显减少。4、睾丸组织细胞凋亡DEHP和镉单独及联合染毒均可以使睾丸细胞异常凋亡,且发生凋亡的细胞主要为精原细胞和精母细胞。析因分析结果显示联合染毒对大鼠睾丸细胞凋亡率影响的交互作用表现为拮抗作用(P0.05)。5、血清睾酮含量与对照组相比较,各个染毒组大鼠血清睾酮含量均较低(P0.05)。析因分析结果显示联合染毒对大鼠血清睾酮含量的影响无交互作用(P0.05)。6、睾丸组织氧化应激DEHP和镉单独及联合染毒可以导致睾丸组织T-SOD、GSH-Px活力降低和MDA含量升高(P0.05)。联合染毒对大鼠睾丸T-SOD活力影响的交互作用表现为拮抗作用(P0.05),对GSH-Px活力和MDA含量的影响无交互作用(P0.05)。7、睾丸组织Akt、bcl-2、caspase-3、caspase-9的mRNA相对表达水平与对照组相比较,染毒组bcl-2、caspase-3、caspase-9 mRNA表达水平没有显著差异(P0.05),而3mg/kg镉染毒组和联合染毒组大鼠的睾丸组织中Akt mRNA表达水平均升高(P0.05)。联合染毒对caspase-9 mRNA表达水平影响表现为拮抗作用(P0.05),对Akt、bcl-2、caspase-3表达水平的影响无交互作用(P0.05)。结论1、DEHP和镉青春期染毒可导致雄性大鼠的体重下降、肝脏肿大,睾丸组织形态结构受到破坏,支持细胞和生精细胞减少,精子活力和密度下降,从而影响正常的雄性生殖功能。2、DEHP和镉生殖毒性作用的可能机制有内分泌功能紊乱和睾丸氧化应激诱导的生精细胞凋亡。3、DEHP和镉联合染毒对睾丸组织T-SOD活性、细胞凋亡率和caspase-9 mRNA表达水平的影响表现为拮抗作用。
【学位授予单位】：武汉科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R114
【图文】：

武汉科技大学硕士学位论文大鼠精子密度及活力的析因分析见表 3.5。DEHP 和镉染毒对实验大鼠及活动精子密度的影响均有统计学意义（P<0.05）。DEHP 染毒对大鼠的影响有统计学意义（P<0.05）。DEHP 和镉联合染毒对大鼠精子密度力及活动精子密度影响的交互作用均无统计学意义（P>0.05）。

武汉科技大学硕士学位论文3.4 联合染毒致睾丸组织病理学改变如图 3.2 所示，对照组的 HE 染色切片中睾丸组织结构正常，多层处于不同发育阶段的生精细胞(精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞)构成，细胞层次清晰且排列紧密，管腔内可见成熟精子(图 3.2 对照)。与对照组相比，低剂量 DEHP 和低剂量镉单独染毒组睾丸组织的大部分精曲小管形态结构没有异常，仅有少量出现生精细胞排列紊乱等异常（图 3.2 a、b）。高剂量 DEHP 和高剂量镉单独染毒组以及联合染毒组与对照组相比，睾丸精曲小管的结构异常较明显，表现为精曲小管萎缩，外壁边缘欠光滑，生精细胞层数减少且排列紊乱，部分组织溶解缺失形成空洞，管腔内成熟精子明显减少（图 3.2A、B、ab、aB、Ab、AB）。

图 3.3 大鼠睾丸组织细胞凋亡情况（TUNEL，200×）图 3.4 联合染毒对大鼠睾丸细胞凋亡率的影响注：*与对照组相比较，P<0.05；每组 3 只大鼠表 3.6 联合染毒大鼠睾丸细胞凋亡率影响的析因分析F P

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