VEGFR-3调控矽肺大鼠早期肺淋巴管增生的作用研究

发布时间：2020-08-26 20:47

【摘要】：目的探讨VEGFR-3调控矽肺大鼠早期肺淋巴管增生的作用机制,同时通过检测矽肺发生过程中炎症因子、致纤维化因子的变化进一步阐明肺淋巴循环在矽肺发病机制中的重要作用,为有效防治矽肺提供新的理论依据。方法SPF级成年雄性大鼠96只,体重250-300g,随机分为对照组、动式染尘组、药物促进淋巴管增生组和手术阻断淋巴管增生组。每组大鼠按采样时间(7d、14d、28d和56d)分为4个亚组,每个亚组6只。采用HOPE-MED8050系列动式染毒控制装置(仓内浓度2000mg/m~3)给予动式染尘组大鼠动式染尘3小时;对照组大鼠不染尘;药物促进淋巴管增生组大鼠除每天给予与动式染尘组相同的处理外另给予大鼠腹腔注射丹参酮IIA磺酸钠(15mg/(kg·d));手术阻断淋巴管增生组大鼠先手术结扎胸导管,之后每天给予动式染尘3小时处理。取大鼠右下肺进行常规石蜡包埋,利用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织炎性病变情况;Masson、天狼猩红染色观大鼠肺组织内胶原沉积情况;免疫组化法检测肺组织内淋巴管增生情况;其余肺组织利用匀浆器进行匀浆提取总蛋白,用Western blot技术定量检测大鼠肺组织内平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、磷脂酰肌醇激酶(Phosphoinositide 3 kinase,PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphos-erine/threonine protein kinase,P-AKT)、血管内皮生长因子受体(vascular endothel-ial growth factor receptor-3,VEGFR-3)、转化生长因子-β(transforming growth fa-ctor-β,TGF-β)、核转录因子(nuclear factor(NF)-κB p65,NF-κBp65)等因子的表达情况;收集各组大鼠胸导管淋巴液,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked im munosorbent assay,ELISA)检测淋巴液内肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平。结果1 HE、Masson以及天狼猩红染色结果显示,采用HOPE-MED8050动式染尘装置成功建立了大鼠矽肺模型。2免疫组化结果表明,与对照组比较,动式染尘组、药物促进淋巴管增生组和手术阻断淋巴管增生组大鼠肺组织内出现不同程度的淋巴管增生。相较于动式染尘组(4.16±0.28),药物促进淋巴管增生组大鼠肺组织内淋巴管增生数量升高(5.83±0.76),手术阻断淋巴管增生组大鼠肺组织内淋巴管增生数量较动式染尘组有所降低(2.66±0.76)。3采用Western blot技术对各组大鼠肺组织内调控淋巴管增生因子VEGFR-3蛋白定量测定结果显示,较对照组相比,三组大鼠肺组织内VEGFR-3含量都有所增加。与动式染尘组(0.97±0.03)相比,药物促进淋巴管增生组大鼠肺组织内VEGFR-3含量明显上调(1.54±0.03),手术阻断淋巴管增生组大鼠肺组织内VEGFR-3含量下调(0.87±0.01)。4对与淋巴管增生有关的信号通路蛋白PI3K、P-AKT进行蛋白定量分析发现,结果与VEGFR-3在各组肺组织内含量变化相同。5对四组大鼠肺纤维化程度进行评定,结果表明致纤维化因子TGF-β、α-SMA的表达在除对照组外含量都有不同程度的增加且变化趋势相同。而与动式染尘组(3.09±0.06和3.10±0.05)相比,药物促进淋巴管增生组大鼠肺组织内TGF-β(2.61±0.09)和α-SMA(2.63±0.01)含量降低,手术阻断淋巴管增生组大鼠肺组织内TGF-β(3.99±0.01)和α-SMA(4.01±0.04)含量升高。6对各组大鼠肺组织内炎症因子NF-κBp65的定量分析结果显示,药物促进淋巴管增生组的大鼠肺组织内NF-κBp65含量较各个时间点的动式染尘组相比有所降低,手术处理组大鼠肺内NF-κBp65含量与染尘组和对照组相比较,蛋白含量增加。7 ELISA试剂盒对大鼠胸导管淋巴液内炎症因子TNF-α表达水平进行检测,结果显示与大鼠肺组织内NF-κBp65在各个分组各时间点的表达情况一致。结论1药物促进矽肺早期大鼠肺淋巴管增生可延缓矽肺发病进程。2 VEGFR-3在矽肺肺淋巴循环中占有重要地位,可以调控淋巴管增生。3 VEGFR-3通过影响PI3K/AKT信号通路调控矽肺早期肺淋巴管增生。图12幅;表13个;参152篇。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R135.2
【图文】：

华北理工大学硕士学位论文持毯上进行术后保暖，待其苏醒。在此期间，为了尽快恢复接受手术大鼠的意识，可用注射器缓慢给予手术大鼠口服生理盐水。待大鼠意识充分清醒后，屏障环境下饲养 1 天，后给予与动式染尘组大鼠相同的处理。每天更换 3 次高压灭菌过的垫料，防止在饲养过程中出现伤口感染导致大鼠死亡，影响后续实验。

HE染色（×100）

Masson染色（×100）

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 周智;贺大璞;;肺淋巴循环的研究进展[J];现代医药卫生;2015年07期

2 张海东;王瑞;曲玮;王辉;杨飞飞;于颐光;;高浓度矽尘接触对大鼠氧化应激的作用研究[J];预防医学论坛;2014年12期

3 王晔;杨茜;程薇波;梁锐超;薛灵抒;曹莹莹;;用HOPE-MED8050动式染尘控制系统建立大鼠矽肺模型[J];环境与职业医学;2013年07期

4 丛翠翠;毛丽君;赵金垣;;肺淋巴系统与尘肺[J];中国工业医学杂志;2013年03期

本文编号：2805675