过氧化物氧还原蛋白-1对小鼠矽肺早期炎症的抑制作用

发布时间：2020-09-16 19:40

　　目的过氧化物氧还原蛋白(peroxiredoxin-1,Prx-1)是一种新型过氧化物酶,本研究利用慢病毒载体使小鼠肺组织高表达Prx-1,观察Prx-1对SiO_2诱导的矽肺肺组织炎症的影响,并初步探讨其作用机制,为矽肺靶向治疗新靶点的选择提供新方向。方法12周雄性C57小鼠随机分为4组,每组10只:1)对照组:给予生理盐水;2)矽肺组:经支气管插管灌注SiO_2悬液(5mg/只);3)转染对照组:经支气管插管灌注SiO_2悬液(5mg/只)+空载慢病毒(10~7TU/只);4)Prx-1转染组:经支气管插管灌注SiO_2悬液(5mg/只)+Prx-1慢病毒(10~7TU/只)。模型制备后,小鼠常规饲养1周。1周后,H.E染色观察肺组织形态变化,免疫组化法检测8-OHdG、CD68、M1型巨噬细胞(iNOS)表达情况,FinePointe WBP全身体积描积系统检测肺功能,免疫印迹法检测Prx-1、NF-κB和P-Src蛋白表达水平、H.E染色高倍视野下计数肺泡灌洗液中巨噬细胞数量,Real-time PCR检测IL-1β、TNF-α、TGF-β1。结果1 H.E染色显示:对照组肺组织结构正常,肺泡间隔纤细,炎细胞浸润少;矽肺组和转染对照组肺组织可见明显矽结节,肺泡腔及肺泡间隔有巨噬细胞和淋巴细胞浸润;与矽肺组和转染对照组比较,Prx-1转染组肺组织病变减轻,矽结节变小。2免疫组化结果显示:与对照组比较,矽肺组和转染对照组8-OHdG、CD68、iNOS阳性表达评分明显上升;与矽肺组比较,转染对照组8-OHdG、CD68、iNOS阳性表达评分无明显变化,但Prx-1转染组三项检测指标的阳性表达评分明显下降。3肺功能结果显示:与对照组比较,矽肺组和转染对照组潮气量(TVb)、每分钟通气量(MVb)、最大呼气流速(PEF)降低,呼吸频率(f)增快;与矽肺组比较,转染对照组的各项呼吸检测指标无明显区别,但Prx-1转染组TVb、MVb、PEF增加,f降低。4肺泡灌洗液巨噬细胞计数结果显示,矽肺组和转染对照组巨噬细胞数量增加较对照组明显增加,两组增加幅度相一致;与矽肺组和比较,Prx-1转染组巨噬细胞数量下降,差异有统计学意义。5免疫印迹结果显示:与对照组比较,矽肺组和转染对照组Prx-1、NF-κB和P-Src蛋白表达上调;与矽肺组比较,Prx-1转染组Prx-1蛋白表达进一步上调,但NF-κB和P-Src蛋白表达下降。6 Real time-PCR结果显示:与对照组相比,矽肺组和转染对照组IL-1β、TNF-α、TGF-β1表达量明显增加;与矽肺组比较,Prx-1组IL-1β、TNF-α、TGF-β1表达量明显下调。结论Prx-1高表达具有抑制矽肺小鼠肺组织炎症的作用,这种作用与抑制ROS/NF-Κb/Src通路激活,减少巨噬细胞向M1型分化和IL-1β、TNF-α等炎症因子合成有关。图10幅;表4个;参51篇。
【学位单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R135.2
【部分图文】：

肺组织,HE染色,矽结节,矽肺

2：PCR 反应 Reps：40，95℃ 5s，60℃ 30~34s；RT-PCR 仪开始扩增。学分析采用 SPSS13.0 和 graghpad 统计软件结果数据进有计量资料采用 ±S 进行统计学描述。两两均数比较采组间比较采用单因素方差分析，差异有统计学意义以 P＜鼠肺组织 HE 染色肺组织 HE 染色结果见图 1。对照组小鼠肺组织结构较完炎细胞浸润。矽肺组小鼠肺组织内可见明显矽结节，肺泡间隔有巨噬细胞和淋巴细胞浸润。与矽肺组比较，转染对化，而 Prx-1 转染组肺组织病变减轻，矽结节明显变小，减少。

小鼠,检测结果,矽肺,对照组

*为与对照组比，P＜0.05；#为与矽肺组和转染对照组比，P＜0.05图 2 各组小鼠肺功能指标检测结果Fig.2 Test results of lung function indicators of mice in each group表 1 各组小鼠肺功能指标检测结果Table 1 Test results of lung function indicators of mice in each group组别 F(BPM) TVb(ml) MVb(ml) 对照组 406.84±18.76 0.43±0.05 174.97±22.61 矽肺组468.02±30.78*0.34±0.03*132.69±11.03*染对照组 463.42±17.17 0.30±0.03 139.17±11.03 rx-1 转染组 434.53±42.94#0.39±0.04#165.58±34.03#F 值 14.46 18.68 6.88

矽肺,肺组织,小鼠,巨噬细胞

- 16 -照组；B：矽肺组；C：转染对照组；D：Prx-1 转组；E：染色评分结果 *为与对照组矽肺组和转染对照组比，P＜0.05图 4 Prx-1 高表达对小鼠矽肺肺组织 ROS 水平的影响 The high expression of Prx-1 effect on the level of ROS in lung tissues of silico组小鼠肺泡灌洗液中巨噬细胞计数灌洗液提取细胞后，制成细胞图片并行 HE 染色，显微镜下随 200 个细胞，进行巨噬细胞计数。结果如图 5 所示：对照组巨噬.60±1.82），矽肺组巨噬细胞数量明显增加（24.60±5.46），差P＜0.05）；与矽肺组比较，转染对照组巨噬细胞数量（23.00（P＞0.05），而 Prx-1 转染组巨噬细胞数量明显下降（15.00计学意义（P＜0.05）。

【参考文献】