生鲜肉中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其耐药性研究

发布时间：2020-09-22 20:04

　　金黄色葡萄球菌是生鲜肉中主要的病原菌之一,能通过食物链传递给人类,使人类感染疾病。随着抗生素的大量使用,金黄色葡萄球菌的耐药性越来越强,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性尤为突出,给临床治疗带来了极大的困难。本研究从泰安各大超市和农贸市场中采集100份生鲜肉样品,采用国标法对样品中金黄色葡萄球菌进行了分离鉴定,并用PCR方法进行了验证,通过纸片扩散法(K-B)进行了抗生素药敏试验,采用双重PCR方法对分离的金黄色葡萄球菌菌株的耐药基因进行了分析。主要结果如下:(1)通过随机采样法采集生鲜肉100份,其中生鲜猪肉53份,生鲜牛肉27份,生鲜鸡肉20份,采用国标法分离鉴定金黄色葡萄球菌,并用PCR方法进行了验证,共有21份样品检出金黄色葡萄球菌,每份阳性样品保存一株菌株;其中生鲜猪肉中检出率为26.4%,生鲜牛肉中检出率为22.2%,生鲜鸡肉中检出率为5%。超市中金黄色葡萄球菌的检出率(22.2%)高于农贸市场中金黄色葡萄球菌检出率(18.9%)。(2)对分离得到的21株金黄色葡萄球菌采用纸片扩散法对13种抗生素进行药敏试验,耐药率由高到低排列:卡那霉素57.1%、阿米卡星47.6%、头孢西丁47.6%、四环素38.1%、环丙沙星38.1%、克林霉素33.3%、庆大霉素33.3%、头孢唑林28.6%、头孢曲松28.6%、氯霉素19.0%、诺氟沙星19%、氧氟沙星4.8%,对利福平不耐药。其中MRSA检出率为47.6%(10/21),PCR方法验证mec A基因,符合率为40%(4/10)。对10株MRSA进行了多重耐药分析,发现都有不同程度的多重耐药现象,耐5种或多于5种抗生素率为50%(5/10),其中对四环素类、氨基糖苷类和头孢菌素类耐药最为严重。(3)对耐药基因的结果显示,21株金黄色葡萄球菌中aac(6')/aph(2'')、aph(3')-III基因检出率最高,为47.6%(10/21),对庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星阳性预测值分别是60%、70%、50%;阴性预测值分别是90.9%、54.4%、54.4%。mec A基因检出率为28.6%(6/21),对头孢唑林和头孢曲松的阳性预测值均是100%;阴性预测值为100%。tet K基因检出率为14.3%(3/21),对四环素的阳性预测值是100%;阴性预测值是68.75%。erm C基因检出率为9.5%(2/21),对克林霉素阳性预测值是100%;阴性预测值是73.7%。
【学位单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R155.55
【部分图文】：

金黄色葡萄球菌,典型形态,光学显微镜,球菌

图 3-1 金黄色葡萄球菌光学显微镜下的典型形态Fig. 3-1 Classical form of Staphylococcus aureus in light microsocope球菌 PCR 鉴定结果CR 方法对 21 株金黄色葡萄球菌进行鉴定，下图为部分

电泳图,多重PCR,电泳图,金黄色葡萄球菌

直径大小约为 1μm。图 3-1 金黄色葡萄球菌光学显微镜下的典型形态Fig. 3-1 Classical form of Staphylococcus aureus in light microsocope色葡萄球菌 PCR 鉴定结果双重 PCR 方法对 21 株金黄色葡萄球菌进行鉴定，下图为部分金葡菌鉴定

药敏,金黄色葡萄球菌,图谱,基因

图 3-3 金黄色葡萄球菌药敏图谱1：头孢唑林；2：头孢曲松；3：诺氟沙星；4：氧氟沙星。Fig. 3-3 The figure of drug-susceptibility testing for Staphylococcus aureus1: Cefazolin, 2: Ceftriaxone, 3: Norfloxacin, 4: Ofloxacin.测 mec A 基因结果用纸片扩散法鉴定为 MRSA 的菌株用 PCR 检测 mec A 基因含有 mec A 基因，符合率 4/10（40%），如图 3-4 显示：

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